ELISA 检测抗幽门螺杆菌特异性蛋白的IgA和IgG抗体

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ELISA 检测抗幽门螺杆菌特异性蛋白的IgA和IgG抗体

2024-07-04 04:42| 来源: 网络整理| 查看: 265

幽门螺杆菌是一长2.5~3 µm的螺旋状的革兰氏阴性菌,80%到90%的胃炎是它引起的,它被认为是引起胃溃疡和十二指肠溃疡的一个主要影响因子。幽门螺杆菌的传统检测方法如黏膜活组织培养和脲酶检测,这两种检测方法只有在相关细菌数量比较高的情况下才有效,并且它们要求在活组织检测后立刻进行鉴定。间接免疫荧光同样也可以用于检测幽门螺杆菌感染。感染了幽门螺杆菌的胃黏膜和十二指肠黏膜同样也可以用血清学的ELISA或Western Blot进行检测。被确定为感染了幽门螺杆菌的病人通常血清学检测表现为阳性。血清学阳性个体,在幽门螺杆菌感染后,其体内抗体会持续一段比较长的时间,而无症状的个体中也会出现相同的现象。血清学阳性率会随年龄而增长。用ELISA 或通过Western Blot来检测抗幽门螺杆菌特异性蛋白的IgA和IgG抗体,可以诊断幽门螺杆菌的急性感染,即使在没有细菌的情况下也可以检测出来。 【检测原理】此幽门螺旋杆菌试剂ELISA定量诊断试剂利用的夹心法,固相包被抗原。用抗人IgG的酶标抗体来检测已结合到固相抗原的样品特异性抗体。加入底物液反应后,所显示的颜色强度与检测到的IgG特异性性抗体成正比。样品的结果可以直接使用标准曲线获得。

【检测方法】在开始试运行之前,将所有试剂,样品和质控品平衡至室温非常重要!1. 一旦测试开始,所有步骤应该完成而不能中断。2. 为每个标准品,质控品或样品使用新的处理塑料移液器吸头,以避免交叉污染。3. 吸光度是温育时间和温度的函数。在开始分析之前,建议全部试剂准备就绪,取下盖子,固定在支架上的所有需要的孔等。这将确保每次移液步骤的时间相同而不会中断。4. 通常,酶促反应与时间和温度成线性比例关系。5. 使用后立即关闭试剂瓶以避免蒸发和微生物污染。6. 为了避免交叉污染和错误升高的结果,加入患者样本和结合物时避免溅到孔底。在37℃孵育期间,盖上封板膜以避免蒸发。 【储存条件】幽门螺旋杆菌试剂ELISA定量诊断试剂必须储存于2-8℃的环境中,避免高温或太阳直射。样品和试剂的贮存及稳定性将在相关章节阐述。开封微孔板在有效期内稳定,但需在2-8℃环境下密封储存。



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