GB4789.5 |
您所在的位置:网站首页 › 尿素酶试验的原理 › GB4789.5 |
一、志贺氏菌的生物学特性 生物学特性:志贺氏菌属细菌为革兰氏阴性短杆菌,长约2~3μm,宽0.5~0.7μm,无芽胞,无荚膜,无鞭毛,有菌毛,不运动;需氧或兼性厌氧,对营养要求不高,在普通培养基(如营养琼脂)上即能生长;最适生长温度35~37℃,适宜pH为6.4~7.8。发酵糖类产酸不产气(福氏和鲍氏志贺菌中的某些血清型偶可产生少量气体)。分为4个群:A群(痢疾志贺氏菌)、B群(福氏志贺氏菌)、C群(鲍氏志贺氏菌)、D群(宋内氏志贺氏菌)。 流行学特征:志贺氏菌产生强烈的内毒素(endotoxin,ET),是一种脂多糖和脂蛋白复合物,为志贺氏菌致病的重要致病因素。A群志贺氏菌Ⅰ型能产生一种毒性极强的细菌外毒素称为志贺毒素(Shigatoxin,Stx),与感染者中毒性腹泻、出血性肠炎、溶血性尿毒症等严重并发症的发生密切相关,其毒性可表现为神经毒性、细胞毒性和肠毒性。在我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢最为常见。 病人和带菌者是细菌性痢疾的传染源,由于饮食从业人员的带菌,可以使食品污染而造成食物型爆发。由于污水渗入供水系统,也常造成水型的爆发。 二、志贺氏菌的检验 三、培养基原理解析 1. 志贺氏菌增菌肉汤培养基 •培养基中除胰蛋白胨、葡萄糖外,加入新生霉素作抑菌剂,并加入少量的吐温80作增溶剂,以帮助样品的充分分散。 •41℃厌氧培养有助于抑制其它杂菌生长。 2. 麦康凯琼脂培养基(MAC) •利用胆盐来抑制革兰氏阳性细菌的生长;利用乳糖发酵,中性红的颜色可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌区分开。 •志贺氏菌呈无色菌落,半透明,光滑,湿润,圆形,边缘整齐或不齐。 麦康凯琼脂培养(MAC) 3.木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐(XLD)琼脂培养基 •脱氧胆酸钠可以抑制革兰氏阳性细菌和部分大肠杆菌,多数志贺氏菌不能发酵木糖,木糖的添加可将志贺氏菌与其它菌株区别开来,因此,志贺氏菌在XLD平板上呈现无色菌落,但少数发酵木糖的志贺氏菌在此平板上会被漏检,XLD平板对宋内志贺氏菌亦有轻度抑制作用。 •志贺氏菌通常呈粉红色至无色,半透明,光滑,湿润,圆形,边缘整齐或不齐菌落。 木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐(XLD)琼脂菌落特征 4.志贺氏菌显色培养基 •利用非志贺氏菌的特异性的酶,使其与酶底物结合形成不同颜色的菌落,而生化特性反应不活跃的志贺氏菌经22~28h培养后,则形成易于识别的白色-粉红色(与培养基颜色相近)的菌落。 •志贺氏菌呈白色/清晰的菌落,大小约为1~3mm,周围培养基变红。 5.三糖铁琼脂培养基 •该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1,只能利用葡萄糖的细菌,葡萄糖被分解产酸使斜面先变黄,但因量少,生产的少量酸。因接触空气而氧化,加之细菌生长利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故斜面后来又变红。底部由于厌氧状态,酸类不被氧化,仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌,则产生大量的酸,使整个培养基呈黄色。另外,因某些细菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氢,硫化氢和培养基中的铁盐反应生成黑色的硫化亚铁沉淀。 三糖铁 6.靛基质试验 •某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合,形成玫瑰吲哚,为红色化合物。 •结果判读:阳性为滴加靛基质试剂后液面立即变玫红色; 阴性为滴加试剂后不变红色。 靛基质试验 7.尿素酶试验 •具有尿素酶的细菌分解培养基中的尿素,产生大量的氨,使培养呈碱性,酚红指示剂在pH6.8时呈黄色,pH8.1呈粉红色。 •结果判读:阳性为玫红色; 阴性为淡橙红色-淡黄色。 尿素酶试验 8.赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶试验 •具有氨基酸脱羧酶的细菌,能分解氨基酸使其脱羧生成胺(赖氨酸→尸胺)和二氧化碳,使培养基变碱,使指示剂显示出来。 •结果判读:阳性为试验管为绿色-蓝绿色,对照管变黄色; 阴性为试验管和对照管均变黄色,或均不变色。 赖氨酸脱羧酶试验阳性 9.糖(醇)发酵试验 •绝大多数细菌都能利用糖(醇)类作为碳源和能源,但是它们在分解糖(醇)的能力上有很大的差异,有些细菌能分解某种糖(醇)并产酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢、甲烷、二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来断定。 •(指示剂为溴甲酚紫)结果判读:阳性为变黄色; 阴性为紫色。 甘露醇发酵试验 10.β-半乳糖苷酶 •某些细菌可产生b-半乳糖苷酶,能分解邻硝基酚-b半乳糖苷(ONPG),生成黄色的邻硝基酚。 •结果判读:阳性为黄色; 阴性为不变色-淡黄色。 ONPG生化管 11. 葡萄糖铵试验 •鉴别细菌利用铵盐作为唯一氮源并分解葡萄糖的试验。溴麝香草酚蓝是指示剂,产酸时培养基由绿色变黄色。 •结果判读:阳性为黄色; 阴性为绿色。 葡糖糖铵利用试验 12. 西蒙氏柠檬酸盐培养基 •细菌能利用柠檬酸盐作为唯一的碳源,能在除柠檬酸盐外不含其他碳源的培养基上生长,分解柠檬酸盐生成碳酸钠,使培养基变碱性。 •结果判读:阳性为蓝绿-蓝色; 阴性为绿色。 西蒙氏柠檬酸盐培养基试验 13. 粘液酸盐试验 •某些细菌能利用粘液酸盐,分解产酸,使培养基中的溴麝香草酚蓝变黄色。 •结果判读:阳性为黄色; 阴性为绿色-蓝绿色。 粘液酸盐试验 四、志贺氏菌的生化鉴定 生化反应 A群:痢疾志贺氏菌 B群:福氏志贺氏菌 C群:鲍氏志贺氏菌 D群:宋内氏志贺氏菌 ß-半乳糖苷酶 -a - -a + 尿素 - - - - 赖氨酸脱羧酶 - - - - 鸟氨酸脱羧酶 - - -b + 水杨苷 - - - - 七叶苷 - - - - 靛基质 -/+ (+) -/+ - 甘露醇 - +c + + 棉子糖 - + - + 甘油 (+) - (+) d 注:+表示阳性;-表示阴性;-/+表示多数阴性;+/-表示多数阳性;(+)表示迟缓阳性;d表示有不同生化型。 a痢疾志贺1型和鲍氏13型为阳性。 b鲍氏13型为鸟氨酸阳性。 c福氏4型和6型常见甘露醇阴性变种。 •附加生化鉴定 •由于某些不活泼的大肠埃希氏菌(anaerogenic E.coil.)、A-D(碱性-异型Alkalescens-D isparbiotypes)菌的部分生化特征与志贺氏菌相似,并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集。需要进一步做葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验(36℃培养24 h~48 h)。 生化反应 A群:痢疾志贺氏菌 B群:福氏志贺氏菌 C群:鲍氏志贺氏菌 D群:宋内氏志贺氏菌 大肠埃希氏菌 A-D菌
葡萄糖铵 - - - - + + 西蒙氏柠檬酸盐 - - - - d d 粘液酸盐 - - - d + d 注1:+表示阳性;-表示阴性;d表示有不同生化型。 注2:在葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验三项反应中志贺氏菌一般为阴性,而不活泼的大肠埃希氏菌、A-D(碱性-异型)菌至少有一项反应为阳性。
五、志贺氏菌的血清诊断 •志贺氏菌属没有动力,所以没有鞭毛抗原。志贺氏菌属主要有菌体(O)抗原。菌体O抗原又可分为型和群的特异性抗原。 •一般采用1.2%~1.5%琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原 •在玻片上划出2个约1cm×2cm的区域,挑取一环待测菌,各放1/2环于玻片上的每一区域上部,在其中一个区域下部加1滴抗血清,在另一区域下部加入1滴生理盐水,作为对照。 •再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1 min,并对着黑色背景进行观察,如果抗血清中出现凝结成块的颗粒,而且生理盐水中没有发生自凝现象,那么凝集反应为阳性。 •如果待测菌的生化特征符合志贺氏菌属生化特征,而其血清学试验为阴性的话,可挑取菌苔于1mL生理盐水做成浓菌液,100℃煮沸15 min~60 min去除K抗原后再检查。 六、所需培养基试剂 用途 货号 名称 规格 增菌 023141 志贺氏菌增菌肉汤 瓶(干粉)250g SR0380 志贺氏菌增菌肉汤配套试剂(新生霉素) 盒(西林瓶)10支/盒 CP0730 志贺氏菌增菌肉汤(需加配套试剂) 盒(袋装)225 mL×10袋 平板分离 029999 木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂(XLD) 瓶(干粉)250g 029999P1 木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂(XLD) 瓶(颗粒)250g CP0180 木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂(XLD) 盒(平板)90 mm×20 022144 麦康凯琼脂 瓶(干粉)250g 024076 麦康凯琼脂培养基平板 盒(平板)90 mm×20 CRM011 志贺氏菌显色培养基 1000mL CRM011A 志贺氏菌显色琼脂平板 盒(平板)90 mm×20 生化鉴定 022080 三糖铁琼脂(TSI) 瓶(干粉)250g CP0080 三糖铁斜面 盒(管装)20支 026050 半固体琼脂 瓶(干粉)250g 075350A 半固体琼脂 盒(管装)20支 CP0150 营养琼脂 盒(管装)20支 024089 营养琼脂平板 盒(平板)90 mm×20 022020 营养琼脂 瓶(干粉)250g 022020P1 营养琼脂(NA) 瓶(颗粒)250g 023090 尿素琼脂培养基基础 瓶(干粉)100g 029100 40%无菌尿素溶液 盒(西林瓶)10支/盒 生化鉴定 075150 尿素(冻干) 盒(西林瓶)10支/盒 075280 赖氨酸脱羧酶培养基 盒(西林瓶)20支/盒 075270 L-鸟氨酸脱羧酶培养基 盒(西林瓶)20支/盒 075290 氨基酸脱羧酶对照培养基 盒(西林瓶)20支/盒 029110 无菌石蜡油 10 mL×1支 075180 β-半乳糖苷ONPG 盒(西林瓶)20支/盒 075140 水杨素(水杨苷) 盒(西林瓶)20支/盒 075160 七叶灵(七叶苷) 盒(西林瓶)20支/盒 075040 甘露醇 盒(西林瓶)20支/盒 075230 D-棉籽糖 盒(西林瓶)20支/盒 生化鉴定 022110 蛋白胨水(靛基质培养基,色氨酸肉汤) 瓶(干粉)100g 075240 蛋白胨水(靛基质培养基,色氨酸肉汤) 盒(西林瓶)20支/盒 029230 靛基质试剂 10 mL×1支 075840 甘油发酵管 盒(西林瓶)20支/盒 075260 葡萄糖铵 盒(西林瓶)20支/盒 023150 葡萄糖铵培养基 瓶(干粉)250g 075200 西蒙氏柠檬酸盐 盒(西林瓶)20支/盒 022120 西蒙氏柠檬酸盐培养基 瓶(干粉)250g 075521 粘液酸盐测试肉汤 盒(西林瓶)20支/盒 075522 粘液酸盐质控肉汤 盒(西林瓶)20支/盒 上一条: GB4789.7-2013 副溶血性弧菌检测及其注意事项 下一条: 食品微生物检验GB4789.4-2016 沙门氏菌检验及注意事项 返回列表 |
今日新闻 |
推荐新闻 |
CopyRight 2018-2019 办公设备维修网 版权所有 豫ICP备15022753号-3 |