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实验干货 | 拿到药物怎么办?溶解?怎么给药?剂量查询?
![]() ![]() ![]() ![]() 细胞实验:给药剂量到底如何确定? 不同的产品,不同的给药方式和给药剂量,即使是同一产品,不同的细胞,不同动物模型,给药剂量也是不一样的。拿到产品后,我们要根据产品名字和自己的实验设计,有目的的去查文献。 ■ 细胞实验,剂量如何查询 细胞实验一般是将小分子药物加入培养基,与细胞共孵育来发挥作用的。给药剂量查询如下所示:输入产品名字,细胞系名称,剂量单位(小分子抑制剂一般用量在 µM 的比较多,重组蛋白类的一般用量在 ng/mL 的范围),文献搜索后,参考文献的使用浓度和使用时间,设计自己的实验。Tips: 也会有小伙伴遇到自己的细胞系没对应文献的情况,建议根据其他细胞系文献的使用剂量,设置梯度进行 “剂量-效应” 曲线预实验,确定合适的使用浓度再进行后续的功能研究。
■ 当小分子抑制剂遇到转染 当然,并不是所有的剂量组都只有小分子化合物,有些伙伴可能会纠结 “我还要给细胞转染,这个时候我要怎么加药呢?” “除了小分子抑制剂,我要加我自己合成的其他药物,该是怎样怎么加药呢?” 如下面这篇文章里,作者团队探究 κ 阿片受体 (KOR) 在 食管鳞状细胞癌 (ESCC) 中的作用及其潜在机制,研究者前期使用 siRNA 敲低 KOR 表达,发现 KOR 下调增强了 ESCC 细胞的增殖、转移和侵袭能力。激活 PI3K -Akt 通路对肿瘤细胞(经 siRNA 敲低 KOR 表达处理)的增殖有促进作用,为探究 AKT 的激活是否是导致转染 siRNA-KOR 的肿瘤细胞的增殖、入侵和迁移的原因,使用小分子抑制剂 HY-10249A (0.5 μM) 对其进行处理[1]。 注意文献这里的描述:“following KOR knockdown”,小分子抑制剂是在转染之后加的,HY-10249A ,AKT 激酶抑制可以逆转 KOR 的抑制对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。
![]() ![]() 动物实验的给药方式包括口服,灌胃,注射 (皮下注射,皮内注射,静脉注射,腹腔注射,肌肉注射等),具体可参考小 M 的往期推文:给药方式犹豫不决?不看你就亏了。 在动物实验给药之前,首先明确自己的实验动物和实验模型,再用关键字查阅文献选择合适的给药方式进行实验设计。如下所示: 在查阅文献的网站搜索框中输入产品名称,动物模型,剂量单位(小分子类产品一般 mg/kg 较多),搜索文献,搜到文献后参考文献剂量设置梯度进行就可以啦! 还是以 LY294002 为案例,假设你用的小鼠是 BALB/c 小鼠,准备做乳腺癌相关研究,那么你可以关键字可以这样设置!“LY294002 breast tumor BALB/c mg/kg” 或者 “LY294002 breast cancer BALB/c mg/kg”。 好了,查到大量文献后,请进入阅读学习模式!
还有这样一种情况,可能你查到的文献都是小鼠,但实际你要做的是大鼠,但是找不到文献支持,下面策略可以考虑:
■ 溶解界老大哥:万能溶剂 DMSO 很多产品并不溶于水,这时候,我们的万能溶剂 DMSO 就闪亮登场了。 细胞实验可以根据您的最大使用浓度,配置 1000X 的储液,使用时培养基稀释到工作液浓度。 Tips: 有时候可能会遇到产品本身溶解度不高的情况,无法配置 1000X 的储备液;要做好溶剂对照,排除下 DMSO 对实验结果的影响。 但溶剂的选择,也不能想当然是 DMSO,前切记切记多看说明书。注:MCE 说明书的溶解方案都是实测数据。有些产品很有可能是万能溶剂也溶解不了,番茄红素为例,它的溶剂是 THF 四氢呋喃。此外,其他有机溶剂 DMF (铂类物质的好朋友),丙酮等,虽相对 DMSO 使用较少,但它们还是药物溶解的好溶剂!见往期推文:溶剂大比拼—细胞实验篇。 ![]() ■ 免疫缺陷鼠,如裸鼠,NGS 小鼠等体弱小鼠,一般建议配置至少 50X 的储液。 可能有小伙伴要问:50X,这是什么意思?此处以Rapamycin (HY-10219) 为例,一般小鼠体内的给药剂量在 1-10 mg/kg。假设给药 8 mg/kg [3],小鼠体重为 20 g,腹腔注射,200 µL 的给药体积。 ![]() 参考文献 下滑查看更多↓ [1] Cell Commun Signal. 2022;20(1):35. Published 2022 Mar 19. [2] Arch Physiol Biochem. 2022 Apr;128(2):426-430. PMID: 31746232. [3] Elife. 2016 Aug 23;5:e16351.PMID: 27549339. |
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