1.3.1 一般情况: 观察大鼠造模期间神态、毛色、进食量、排泄物性状及体质量变化等.

1.3.2 腹泻指数测定: 分别在造模前1 d及7、10、14 d于造模结束后测当日14:00-19:00之间5 h内腹泻指数. 腹泻指数测定时在鼠笼内垫清洁滤纸, 每隔1 h换滤纸. 腹泻指数 = 稀便率(每只大鼠所排稀便数与总便数之比)×稀便级(每只大鼠所有稀便级数总和与稀便数之比)[12].

稀便级数分级方法: 以稀便污染滤纸形成污迹面积的大小定级, 分为４级: 1级为污染直径3 cm.

污染直径的测量方法: 粪便形状为圆形, 则直接量直径; 若粪便形状为椭圆形则测量最长和近似圆的直径, 相加除以2.

干便与稀便的区分方法: 以滤纸上有无污迹为标准. 粪便次数以每粒或每堆(不能分清粒数者)为1次.

1.3.3 内脏敏感性测定: 分别在造模前1 d及各个时间点造模结束后, 对各组大鼠进行内脏敏感性检测. 检测前24 h禁食不禁水, 检测当天称重, 予乙醚吸入麻醉. 预先制备气囊导管: 将5英寸圆形乳胶气球在5 cm和6 cm处标记, 沿6 cm处剪下, 将气球用AB胶固定于8F导尿管, 在5 cm处系以手术缝合线, 气球黏接处以手术胶带缠绕固定, 经检测无漏气方可选用. 将石蜡油润滑后的自制气囊导管经肛门插入, 气囊尾端距肛门1 cm左右, 用医用胶带将导管与大鼠尾巴根部固定. 将大鼠置于自制亚克力观察箱中(20 cm×8 cm×6 cm), 待大鼠苏醒并适应30 min后开始实验, 对大鼠结肠内气囊分段加压(每10 mmHg), 记录直到出现腹壁撤退反射(wall withdrawal reflex, AWR)评分3分的压力值, 重复测量3次, 每两次测量间隔5 min[13,14].

AWR评分标准[15]: (1)大鼠情绪基本稳定, 评分为0分; (2)大鼠情绪不稳定, 偶尔扭头, 评分为1分; (3)大鼠腹背部肌肉轻微收缩, 但腹部未抬离地面, 评分为2分; (4)大鼠腹背部肌肉较强收缩并把腹部抬离地面, 评分为3分; (5)大鼠腹部肌肉强烈收缩, 背部成弓形并把腹部、骨盆及会阴部抬离地面, 大鼠肢体伸展紧绷, 评分为4分.

1.3.4 胃肠组织形态学变化: 各组大鼠在造模14 d结束后第2天, 用10%水合氯醛(7 mL/kg)腹腔注射麻醉后, 取十二指肠球部及距肛门11 cm处结肠2 cm, 于4%多聚甲醛中固定48 h以上, 蒸馏水冲洗, 梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋、切片、HE染色, 光镜下观察十二指肠及结肠病理学变化.

1.3.5 研究过程中的质量控制: 为了避免主观因素可能造成的干扰, 本研究中行为学指标观测人员固定, 同时借鉴临床研究中的盲法原则, 在结直肠扩张确定疼痛压力阈值中对操作人员施盲, 施盲因素为动物分组及编号情况. 此外, 为避免生物节律影响, 同一实验操作固定在一天中的特定时段.

统计学处理 统计学方法应用SPSS19.0统计软件进行数据处理和分析, 符合正态分布的计量资料以mean±SD表示, 非正态分布的计量资料以中位数, 极差[M(Q)]表示, 采用两个独立样本比较的Wilcoxon秩和检验和单因素方差分析(ANOVA)行数据统计, P