[求助]建立裸鼠皮下移植瘤模型时, 如何保证长出的瘤子大小均一形状规则? |
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偶现从事卵巢癌基因治疗方面的实验, 正在建裸鼠皮下移植瘤模型, 想请教各位战友: 如何才能使同一批接种的裸鼠长出的肿瘤大小均一且形状规则? 偶用的是人卵巢癌细胞系AO接种裸鼠(4-6周, 雌性, 体重15-20克不等, 本来实验要求裸鼠体重应在18-20克, 但动物房老师说要么保证体重均一,要么保证周龄相同, 想要两者兼得做不到), 数量是1*10^7个每只, 种在臀部皮下, 平均1周左右即可成瘤, 但接种一月后观察发现肿瘤大小极不均一, 直径从5mm-17mm不等, 且形状很不规则, 极不便于测量(当初接种的时候打的皮丘很规则的, 几乎都是半球形或椭圆形, 且拔针后基本没有细胞悬液漏出). 后在园子里搜索了相关帖子, 受益非浅, 有很多战友都提到用细胞株先接种裸鼠, 长出瘤子后取出肿瘤, 剪碎制成组织悬液再接种裸鼠, 或分割成一定大小的组织块, 将其移植到裸鼠皮下. 据说这两种方法成瘤率很高, 长出的肿瘤形状规则, 大小一致, 且工作量小. 偶正打算试试, 但有几个问题想请教各位: 1. 若用组织悬液接种, 细胞的量肯定不如直接用细胞株消化计数后接种的方法来得精确, 很难保证每只小鼠接种的细胞数量一致, 既然如此, 怎能保证长出的瘤块大小均一呢? 同样, 用肿瘤组织块皮下移植的方法也存在这个问题. 2. 如果同一批接种的小鼠长出的肿瘤大小不一, 按照我的实验设计, 需待肿瘤长至一定大小后再给治疗, 这样的话同组的小鼠必定不能同时给药, 且同组之间体重, 周龄等因素必定不均衡, 造成数据处理上的困难. 3. 是否可以同时接种大量小鼠, 待其成瘤后, 挑出其中肿瘤大小一致的, 再分组观察, 分别处理. 按照我的实验设计, 需分4组, 每组5只左右, 共计20只左右, 这样的话是否需要接种50只左右的小鼠? 以每只裸鼠80RMB的成本计算, 代价是否太高了点? 敬请各位xdjm不吝赐教, 指点迷津!不胜感激! 今天用组织悬液接种法试验了4只小鼠，发现了新的问题：用眼科剪很难把瘤块剪得很小，撑死也就1MM3左右了，对于我用的针头（18号，护士mm用来配液的）来说还是大了点。想请教用过这种方法建模的战友们有没有更好的办法？有人提到将瘤块研磨成细胞悬液后再接种，不知这样会不会破坏细胞？有这种无菌的研磨工具么？ 请xdjm们多多指教，大家一起来讨论，共同进步！ 首选给你泼一盆冷水，呵呵，不是所有的肿瘤都能够长的均一，形态规则的，我做了8年的肿瘤模型，接触过三四十种瘤株，能够体积均一，形态规则的瘤株不是太多。一般构建肿瘤模型，裸鼠主要保证周龄，周龄小一点好。回答你一楼的问题：1. 如果你把组织研磨成细胞悬液，那么只要注意混悬均匀，那么每只小鼠接种的细胞量也是均匀的，至于计数，一般大多数人都是凭经验看组织悬液的颜色和透明度来确定的，对于经验不多的人来说，可以用台盘兰染色计数，但是注意一点，组织悬液的接种量不能和细胞株悬液相比的，具体的数值需要你经过试验确定。瘤块移植均一度是比较难于控制的，注意这么几点：a组织的选取很重要，什么坏死的部分啊，表面的包膜阿，都得去干净，你留下来的组织质量要好，而且相对比较均一，然后剪成小块的时候，多剪一些，比如你要接种30只，你可以照着50这个数来剪，然后接种时，往接种针里塞组织的时候以针孔作为一个大概的标尺衡量，选取相对比较均一的小块来用。==，我楼下继续。2和3是一个问题，解决的办法就是你自己在第三点中说的，接种的数量多于你试验所需数量，但是多多少，具体就要跟据尼自己的水平，以及这个瘤株的特性来确定了，有的瘤株接种后只能有不到一半的量可用，有的瘤株只需要淘汰一两只其余的都可以用于试验。一般来说，接种后有70%可用于试验，在瘤体积平均值为100mm3左右的时候，SD为平均值的1/3左右是比较正常的。比如你试验需要20只模型，一般的瘤株接种30至左右就差不多了。另外纠正你一个观点，所谓肿瘤生长至一定大小是指的平均值，不可能每一只肿瘤都是一样大的，关键是控制SD不能太大，一般SD为平均值的1/3算正常，1/4就很漂亮，1/5那是极品了。 关于剪瘤块的问题，你不能拿出绣花的劲来修饰，你想把某一个小块修饰得完美无缺要花极大的精力和时间，就我的经验来感觉，剪瘤块完全是一个无心插柳问题，你放心大胆的去剪，尽量往小里剪就可以了，如果以后做多了手上有感觉了可以注意一下均一度，反正最后接种针的针孔是一把尺，符合这个尺寸的就上，不符合的就淘汰，手上没什么感觉的时候，多剪一些备选吧，总有合适的。 另外随便说几点注意的：首先你说的接种针我觉得很奇怪，怎么会是配液用的呢？不会是普通的注射针头吧？大哥，要用穿刺针的说，里面有一根实体针的，接种的时候要用它把瘤块顶出去的啊。关于针号，18号和20号都可以，你要是觉得你老是剪不小瘤块就用20号吧，没听说再用更大的了。关于组织悬液的研磨，用玻璃均浆器，用之前用锡箔纸包起来高压灭菌即可，注意，玻璃匀浆器的选择很重要，直接关系到细胞存活率的高低，主要要挑选的就是里面的磨杆和外面那根管子不能契合的很紧密，否则的话，磨出来就没有多少活细胞了，挑选的时候，用手抓住里面的磨杆摇一摇，感觉能哗啦哗啦转动比较合适。研磨的时候只能朝一个方向研磨，不能超过三次，研磨后的组织悬液用200目筛网过滤。关于均浆法和插块法的优劣，众说纷纭，总的来说这两点是比较公认的：插块法成瘤率好，保持肿瘤形态方面比较好；匀浆法对瘤组织破坏比较严重，成瘤率偏低，但是均一度相对较好。还有一点：这两种方法都做到高手境地的时候，没有太大的区别。另外有一个特例，我们曾经碰到过不能用匀浆法的瘤株，无论怎么操作，细胞都基本死光了。无论哪种方法，瘤组织脱离体内后的时间要尽量短，争取1个半小时解决问题，用的溶酶选择顺序是这样的：相应的不含血清的培养基〉PBS〉saline。如果初学者手脚不快可以分成几只瘤种来做，比如，你要接50个，可以取一个瘤源，接25只，再取另一个瘤源，再接25只，注意两个瘤源必须来自同一批。先想到了这么多，随便乱扯一通，希望能对你有帮助，有错误的地方，还请大家指点。首先非常感谢swordzjsh兄的耐心指点，让偶获益非浅，不胜感激！再次，还有几个问题想请教swordzjsh兄：1、“。。。然后接种时，往接种针里塞组织的时候以针孔作为一个大概的标尺衡量，选取相对比较均一的小块来用。。。关于剪瘤块的问题，你不能拿出绣花的劲来修饰，你想把某一个小块修饰得完美无缺要花极大的精力和时间，就我的经验来感觉，剪瘤块完全是一个无心插柳问题，你放心大胆的去剪，尽量往小里剪就可以了，如果以后做多了手上有感觉了可以注意一下均一度，反正最后接种针的针孔是一把尺，符合这个尺寸的就上，不符合的就淘汰，手上没什么感觉的时候，多剪一些备选吧，总有合适的。”swordzjsh兄说的这种方法是插块法吧？ 2、“首先你说的接种针我觉得很奇怪，怎么会是配液用的呢？不会是普通的注射针头吧？大哥，要用穿刺针的说，里面有一根实体针的，接种的时候要用它把瘤块顶出去的啊。”偶用的就是普通的18号注射针头，连上1ml的注射器针筒，偶是将瘤块尽量剪小了，悬浮在PBS中，制成悬液，用1ml注射器连上18号针头抽吸，然后接种，每只小鼠种0.2ml。你说的方法是不是不用针筒的？直接用镊子将剪小的瘤块塞进穿刺针的针头里，接种时用针芯将瘤块推至皮下？这样的话种进去的只是瘤块，不是悬液对么？那每只小鼠大约种几块呢？用的是哪种穿刺针？骨穿针行不行？ 多谢swordzjsh兄了！！你做了这么多年的肿瘤模型，想必经验非常丰富了，以后有机会还要多多跟前辈请教啊 偶是新手，也想问问要是直接用细胞株消化计数后接种，如何保证移植瘤大小均一，形状规则尼？有啥注意事项啊？本人觉得你细胞量太多，一般接种量为1－5×10^6，接种体积为0.1-0.15ml/只，接种体积太大，退针后细胞溶液容易漏掉，也易形成不同的形状，进而使你的肿瘤模型形态各一。所有关于往接种针里面塞肿瘤组织块的描述都是指的插块法。插块法的大概过程是这样的：处死荷瘤鼠，体表用消毒液浸泡，然后用消毒剪刀镊子剖出肿瘤组织，浸于适量的溶酶中，保证肿瘤表面的湿润，挑掉肿瘤组织表面的包膜，将瘤组织剪开，去除肿瘤中心坏死部分，保留鱼肉样（个别肿瘤组织有颜色，具体情况具体分析）的健康肿瘤组织，剪成小块，用镊子塞到接种针的针孔中，然后由裸鼠皮下进针，针头到达预定位置后，用接种针中心的实体针将瘤组织块推出即可。每个接种位点只接种一块，否则形状会很不好。接种针可以用一种20号的穿刺针，具体名字忘了，周一我到公司看看才能知道。匀浆法前面和插块法是一样的，但是将肿瘤组织剪成小块后，将瘤组织小块置于玻璃匀浆器中，加入一到两倍体积的溶酶，匀浆，然后将匀浆液用200目筛网过滤，再用溶酶将过滤后的匀浆液适量稀释，稀释的时候可以用溶酶冲洗筛网，然后用1ml注射器接6~7号注射针头，吸取匀浆细胞悬液，接种于裸鼠皮下。对照起来看，你可能会更明白一些。8年的经验根本不算什么，我认识的很多老师们都做了一辈子了，那才真是老前辈啊。非常感谢swordzjsh兄耐心细致的讲解，让偶等初学之人茅塞顿开啊！多谢多谢！还想请教swordzjsh兄的是：20号针头能容纳的瘤块直径有多大？1mm3差不多吧？这样大的瘤块种进去以后，如果长到1000mm3的大小，平均需要多长时间呢？因为我的实验设计的是等长到约1000mm3后再用药，时间紧迫，我希望瘤子能够尽快长到符合要求，接种的瘤块能否再大一些呢？另外，还要烦劳swordzjsh兄一定帮我看看接种针到底是哪一种，哪里有的卖，我问过实验室的老师她也不知道有这样的专门用于接种瘤块的针。再次衷心地感谢swordzjsh兄！！ 接种针不是专门用于接种瘤块的，也是一种穿刺针，具体叫什么我忘了，今天有事没有去公司，名字看不到，明天告诉你吧。不难买的，大一点的医疗器械公司应该都有的卖的。具体能够容纳的直径我也说不好，呵呵，1mm差不多。我没有接触过你做的瘤株，所以不好说长到1000mm3需要多少时间，不同的瘤株之间差的很远。20号针的针孔直径就是那么大了，接不了更大的，除非换用更大号的接种针，但是一般常用于接种最大的就是20号了，为什么没有人用更大的，具体原因我还真说不上来。不过我很奇怪，你为什么要等肿瘤长到这么大的时候才开始试验，一般都是100到300mm3之间，事实上，做药效的时候，都巴不得瘤子小一点的时候就开始给药，大多数试验肿瘤体积刚到100mm3左右就开始给药了，当然你可能不是做药效，不清楚你的用途，所以不敢乱说。另外肿瘤长到这么大的时候，SD也会非常大了，一般的肿瘤生长时SD与平均值的比值不是不变的，而是越来越大，换句话说，肿瘤越长越大，也就越来越不均匀，当然不是所有的肿瘤都是这样的，也有维持这么比值基本不变的。本来你要是想让肿瘤长得非常快，而又不是做药效试验（药效试验要求肿瘤体内传三代以后用插块法或者匀浆法接种，而且起始瘤体积在100~300mm3之间），那就还是应该用细胞接种，因为细胞接种可以接很高的浓度。但是你是过细胞接种效果不好，而且我注意你的肿瘤在细胞接种后长得速度挺快的，一个月直径就有5~17mm，所以，还是在插块法上找找路子吧，相对来讲，匀浆法因为对细胞破坏比较大，所以不推荐了。具体意见我现在只能提一点：我注意到你接种的部位是臀部皮下，如果没有别的特别的需要，还是接种到腋下皮下比较好，那里血管丰富，有利于肿瘤的生长。其实还有一种方法，可以让你的肿瘤长得很快，而且形态什么的都还比较理想，但是这个方法需要比较丰富的经验，而且需要时间去摸索条件，你要是有兴趣可以试一试：你把体内的肿瘤组织匀浆后，200目筛网过滤，0.17N NH4Cl破碎红细胞，然后用大量培养液稀释，离心，去除上清，细胞转移至细胞培养瓶内培养扩大，在5代内接种至裸鼠体内，这时候你可以用很高的细胞浓度接种，不过要注意的是，浓度高了，如果接种的时候控制不好，形态各异，大小不匀的现象就会比较严重。这个方法是美国常用的一种构建肿瘤模型的方法。这个方法你需要时间摸索一些条件，有兴趣么，有兴趣跟贴，我再详细和你说这个方法。另外你再说清楚你的试验目的，试验设计是怎么样的，时间还有多少，要根据你的要求，权衡一下，选择合适的方法，否则你会得不偿失的。很精彩！非常感谢swordzjsh 站友对本版的热情支持！swordzjsh兄真是厉害，居然知道这么多种方法啊！偶对你越来越景仰了！呵呵具体地说，我的实验是将一种诱导细胞凋亡的基因包装成病毒，注入人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤体内，观察它治疗肿瘤的效果。其实我查的文献也多是在肿瘤体积长到100mm3左右即开始打药，但带我实验的老师说需要肿瘤直径长到1cm以上才可以，因为如果瘤子太小就处理，担心到实验结束时瘤子已经消失了（我们需要标本检测相关指标）。另外，我用的载体是腺相关病毒，它的特性是在体内感染细胞约4周以后，外源基因的表达才达到最高水平，并且可以持续数月。据我查的文献，目前用AAV作基因治疗载体的研究，大多是抑制肿瘤血管生成等方面，他们几乎都是在接种瘤细胞的同时就打药，以预防肿瘤的生长。而我的实验是要等肿瘤长出来以后再给药，观察它诱导细胞凋亡的作用，所以也难以确定给药的时间（前面提到的肿瘤长到100MM3给药的文献用的载体都是其他病毒，其中腺病毒用得最多，但它转染细胞后几天外源基因表达就能达到高峰，且持续时间短）。关于这个问题，我打算再跟老师讨论讨论。 我已经准备将接种的部位转移到腹股沟了，应该和腋下的效果差不多吧？ 我应该在今年6月就要答辩，所以时间挺紧迫的。swordzjsh兄上文提到的那种接种方法，大概需要多长时间才能熟练掌握呢？对我来说是不是有点来不及了？不过，不管怎样，还是希望swordzjsh兄能够不吝赐教，我想，这不仅是我，也是众多DXY战友们的期望。 本来我的实验设计里还有一部分是做腹腔移植瘤的，因为腹腔播散更符合卵巢癌的特性，但建了一批腹腔移植瘤模型后发现，直到2个月左右其中部分小鼠才明显看出腹部膨隆了，而且出现了恶液质，后来处死了几只，解剖后发现腹腔满布大小不等的瘤子，但腹水却少得可怜。后来我们讨论可能是这种细胞株的特性就是产生腹水少。查文献，腹腔移植瘤的用药时间选择上大概有两种：1、判断长出腹水时给药（文献报道2周到2月不等）；2、接种后一定时间即给药，比如6天；我现在遇到的问题是如果以前者为依据，一是时间来不及，二是可能瘤子已经长得太满，错过了用药的时机；如果以后者为依据，每只小鼠长出的腹腔瘤本来就有差异，很难说到底是不是处理的结果。所以，我正在考虑是否要将这一部分删掉不做。就这个问题，很想听听swordzjsh兄的高见！ 谢谢！ 首先，接种针的名字是：胸腔（胸膜？）活检针，不好意思，胸腔还是胸膜记不清楚了，呵呵。我不知道你们前期研究的情况怎么样，有没有作体内抗肿瘤的药效？试验结束的时候居然能够把肿瘤打掉？说点题外话，问问，你们这个东西的毒性以及安全性如何啊？很羡慕啊，这么多年也没见过几个能把肿瘤打掉的药呢。如果真的能够把肿瘤打掉，我觉得你这部分目的是不是应该分开做：一个试验是正而八进的药效试验，另一部分作机理方面的验证，这样子，你做机理部分的样本数和组数就不需要那么多了，换句话说，你需要的大肿瘤也就少，相对好控制一些。因为我上次说过，肿瘤长得越大，均匀度也更难控制。而且，你做机理研究的试验，就不需要严格按照药效试验那样一定肿瘤在体内传三代什么的，可以直接用细胞株接种，这方面你也有一定的基础了，虽然这样接种出来的肿瘤会不太均匀，但是做机理研究需要的模型数量也少，你可以相对多接种一些动物以保证最后用于试验的模型数，而且做为机理研究，你可以淡化肿瘤体积的数据，把这个机理研究的试验分析重点引导至基因表达量等方面。还有，我看你接种的浓度高了点，作药效的时候，一般的肿瘤大多数接种量都在1X106/site左右，你这么高的浓度，是比较容易造成形态不匀等问题，你可以双管齐下：一方面缩减试验所需样本量，相对的提高了你选择合适模型的余地，另外，试一试降低接种浓度，我建议在5X106/0.1ml/site左右就差不多了，应该可以改善肿瘤的均匀度。这样你的药效试验也显得正规、漂亮，如果试验结束的时候能够把肿瘤打掉，那么结果就更漂亮了。这只是我的一点想法，你们长期做这个项目，主要的思路还是应该有你和你老板讨论以后确定。腹股沟也不如腋下，而且腹股沟生长的肿瘤很容易在裸鼠的移动中很容易被磨烂，造成肿瘤全面的溃烂。特别是做机理研究的肿瘤，起始的时候就比较大，试验结束的时候，阴性对照组的肿瘤体积就很大，很容易被磨烂，你接种在腋下的时候也要注意这一点，接种的位置要往背部靠一靠，避免肿瘤长大后被拖在动物的身体下面。 对于你的时间来说，确实掌握我说的那种方法没有太多的时间，你还是应该致力于改进现在已经掌握的方法。 你们做腹腔移植瘤应该是以死亡时间作为观测指标的吧，你们这种不太产生腹水的瘤株应该以接种后多少时间做为给药的起始时间，至于组内样本之间的差异与组间差异的比较，很简单，以统计分析为准，差异有统计学意义了，那就是药物起的作用，如果没有，就只能认为是自身的个体差异。不过做腹腔移植瘤有一个问题，你们的药效如果很好的话，试验持续的周期比较长，因为考查的是死亡时间，阴性对照组可能很快就死亡了，但是阳性对照组和样品组要一直观察下去，至少要到多少天我忘了（好像是45~60天，参考书不在手边，一时记不太清楚），你可以去查一查相关的资料，如果你们的药效很好，受试动物一直不死亡，就要观察到那个期限才停止，然后认为它们的死亡时间是大于多少多少天。而且我注意到，接种后两个月造模的动物还没有死亡，这样子算下来，时间周期不够了，建议你放弃这部分的试验。可以留给你师弟师妹们去做。 关于那个美国常用的肿瘤模型的构建方法，今天很晚了，我要睡了，且听下回分解吧，反正这个现在对于你来说不是那么急迫了，呵呵。 swordzjsh兄的讲解很细致、很透彻，每次读你的帖子总有不少收获，谢谢！我知道你说的接种针了，是“胸膜活检针“，我在内科实习的时候曾经见主治做过一次胸膜活检。 我们这个课题以前一直做的是体外实验，到我这里是第一次做体内，所以也没有师兄师姐们的经验可寻。至于老师说肿瘤太小时给药怕把瘤子打没了，我估计也只是她的猜测，并没有什么事实根据的。让swordzjsh兄见笑了 从现有的体外实验的结果来看，我们做的这种基因诱导调亡的效果挺明显的，至于毒性么，我们构建的质粒是带有肿瘤特异性启动子的，理论上讲它应该只在肿瘤组织中表达，对正常组织没有毒性，体外实验也证实了这一点。 swordzjsh兄说的药效实验和机理实验的区别我不太理解，但我想我的实验应该是以药效为主的吧，主要观察生存期、肿瘤大小、对正常组织的毒性，并检测基因表达水平等指标，顺带探讨一下机理。我的样本量也不算大，每组5-6只裸鼠，分别给予rAAV-目的基因、rAAV、PBS等处理，观察上述指标，评价治疗效果。 另外，swordzjsh兄所说药效实验需要肿瘤在体内传3代以上，我的实验也需要这样吗？我查卵巢癌基因治疗方面的文献，他们建立动物模型都是直接用细胞株接种的，长出瘤子来就用药。关于swordzjsh兄所说减少细胞量的问题，我会考虑，当初接种那么大量一是害怕成不了瘤，而是希望成瘤后能长快点，现在看来这都不是问题了。 关于腹腔移植瘤，我还是想试一试。仔细观察发现，当初腹腔接种后没有成瘤迹象的小鼠，部分在腹股沟皮下长出了瘤子，估计是接种时误入皮下造成的，而且根据目前我们细胞株的成瘤率，我相信腹腔接种应该都能成瘤。我们腹腔瘤观察的指标除了生存期，也有肿瘤的大小和重量，我可以待终止实验处死小鼠后，取所有的腹腔瘤称重，比较不同处理组间肿瘤的重量、最大瘤的体积、腹水量、目的基因表达水平等指标。我的细胞株皮下成瘤需要的时间大概是1周，所以我打算在腹腔接种1周后就给药，接种量1*10^7。 关于我上述的实验设计，还请swordzjsh兄多提意见！ 最后，请教一个弱弱的问题：腋下接种一个人不好搞定吧？swordzjsh兄在腋下接种方面可有经验或诀窍传授给偶辈新手？另外，在动物实验方面，包括实验设计、具体操作方法等，swordzjsh兄有没有好的书或资料可以推荐给我们？ 再一次致谢并期待你精彩的“下回分解”！ 你评测基因表达水平等指标需要的组织的量大么？还是说只需要一点点就好了。如果只需要一点点那么可以在同一个试验中得到所有你所需要的数据。一个正规的药效试验是这样的：分5个组，包括阴性对照组，阳性对照组，高中低三个剂量的治疗组。其中阴性对照组的动物数应该是其余各组动物数的两倍，更精确一点说，阴性对照组的动物数=其余组的动物数*不包括阴性对照组的所有试验组数的平方根，比如你的试验中，每组6只动物，5个组，其中一个阴性对照组，那么阴性对照组的动物数应该为：6*（4的平方根）=6*2=12。其中阳性对照组应该选用已上市的药物，而且最好与你的研究样品属于同一类药物。裸鼠试验的话每组的动物数（不包括阴性对照组）为5到10只，试验结束的时候，各组动物的死亡数不得超过20%，所以节约一点的话，大家都用6只动物，为什么，自己可以想一想，呵呵。但是如果希望统计上有优势一点，一般选用8只。关于瘤源，用于药效试验的瘤株应该在体内至少传三代以上才可以用于试验。构建肿瘤模型后，当肿瘤体积生长至100~300mm3的时候分组给药，实际上，除非有特殊原因，一般都是平均值刚到100mm3就分组给药了，原因我前几次说过了。试验结束后，与阴性对照组相比，抑瘤率大于40%，并且差异有统计学意义，可以认为在本次试验中表现出了疗效，要认定该样品有抑瘤作用，需要两个以上的瘤株各重复三次（新的指导原则不知道生效没有，新的指导原则是三个以上的瘤株各重复两次）。另外阴性对照组的瘤重应该大于1g，否则认为肿瘤生长不良，本次试验作废。以上这些是SFDA编写的抗肿瘤药物研究指导原则的标准，可以说是中国最权威的标准了。这样的一个试验的背后，需要有着大量预试验的支持，比如给药剂量，给药途径，给药的疗程（一天一次？一天几次？一周一次？一周几次？先连续给几天然后就不用给药了？或者干脆就只给一针就可以有很好的效果？）这里面有大量的工作。当然，你作为一个学术性的东西，不需要把这些条件都优化到最好，但是至少得优化到能够说明你的问题。比如，给药途径，有的腺病毒药物需要瘤内注射才能够有效，一般常规的i.v、i.p什么的效果就很差，这个你得试验吧。还有剂量问题，少了不起作用，剂量大了又担心会有毒性，而且剂量大了你还得考虑你们样本的制备能力。还有疗程的问题，常规的抗肿瘤新药会采取每天给药的方式，但是腺病毒药物有的是只需要给三天就好，然后病毒会自我复制增殖放大，效果可以延续到试验结束。甚至给药三天后检测病毒量可以发现，虽然停药了，但是病毒量仍然能够持续增长。而在抗肿瘤药物的研究中，还有一部份工作是机理研究，就是探讨所研究的药物是由什么途径发挥抗肿瘤作用的，特别是作为学术研究，这方面的工作更为重要，但是在这方面，目前没有一个严格的标准之类的东西，所以，索设计的试验只要能够足以说明问题就可以了。作为体内试验来讲，肿瘤模型不一定要体内传三代，也不需要有三个剂量组，但是对于你们这种药物，能够看到基因表达水平与抗肿瘤的效果成线性相关那么会更好。腹腔移植瘤，你想在试验结束后去所有的肿瘤称重会比较难办的，工作量很大，因为在腹腔会是很多小瘤子，你要一个个的去摘下来，还要到每个犄角旮旯里去找有没有遗漏的，而且称瘤重和存活期是两个矛盾的指标，在一次试验中不可能同时考察这两个指标，因为瘤重需要同时处死动物，而存活期各动物的死亡时间是不同的，你不可以把不同时间死亡动物的瘤中放在一起比较。腹腔接种的接种量是一个很麻烦的东西，接种量大了，很可能大家一块死亡，前后差不了几天，说明不了问题，接种量小了，阴性对照组的动物也不死亡，试验失败。你应该去查一查文献，首先看看别人有没有人把这个瘤株用于腹腔接种的，如果有，看看他们的接种条件，给药时间等等。腋下接种很好操作阿，我倒是觉得比你想用的臀部、腹股沟等地方好多了，左手持动物（如果你不是左撇子的话），大拇指往上拧一下就可以把动物的右前肢拉上去，暴露腋下要接种的部位，注意稍微用中指在动物的身体下面垫一下，这样子动物腋下的整片区域都是平整的，便于操作。如果用插块法，准备5~6根接种针，一次全部穿上瘤块，一起接种，不要穿一个瘤块接一个，很慢的。熟练以后，我一个人接100只老鼠需要1个半小时左右，有的高手100只老鼠，一个小时都不要的。如果打细胞，看看这个帖子，我里面说了一些相关的注意事项：>欢迎各位站友讲讲自己的心得 谢谢swordzjsh兄，我的裸鼠基本都长出瘤子了，但正如你说得长得比较慢，而且没到我实验要求的时间很多就因恶液质或其他原因就挂了，所以就只能提前把他们都处理掉了。[求助]请问哪里可以查阅 SFDA编写的抗肿瘤药物研究指导原则的标准？我们图书馆好像没有，需要自己买书吗？有没有3mm的穿刺针,用来代替接种针? |
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