2. 计算胚胎发育时间：将发现阴栓的日子定为零天，胚胎发育时间由这一天开始计算。整个孕期约为 19~21 天，分离完整胚胎进行细胞培养的合适时间为第 13 天，此时胚胎已相当大，但仍含有大量的未分化的间充质细胞，这是培养细胞的主要来源。但分离、处理超过妊娠期一半的胚胎可能需要许可证（例如在英国），所以用 9~10 天的胚胎也许更可取。虽然从这种胚胎分离的组织细胞的数目相对少一些，但能够生长的细胞的比例较高。除了脑和心脏之外的大部分器官于妊娠第 9 天开始形成，11 天之前很难分离。单一器官的分离在第 13~14 天比较容易，大部分器官于第 18 天完全形成。

3. 拉颈处死小鼠（U .K Schedule I procedure），用 70 % 乙醇仔细消毒其腹部表面。

4 . 于膈膜附近的腹中线位置横向撕开皮肤，向两侧翻开皮肤，显露未接触的腹壁。

5. 用无菌剪刀沿腹中线纵行剖开， 露腹腔脏器，此时可见充满胚胎的子宫位于后腹腔。

6. 取出子宫置于盛有 10 ml 或 20 ml DBSS （取材用BSS （含有高浓度抗生素的BSS（50 ml 盛于无菌烧杯中，用于冷却烧过的器械）），装在 25~50 ml 的螺口试管或通用容器内）的 25 ml 或 50 ml 的螺口瓶内。

7. 将未处理的子宫移入培养室，转人新的培养皿中，内含无菌的 DBSS 。

8. 分离胚胎：

(a) 用两个无菌镊子撕开子宫，注意保持镊子尖闭合，以免过度破坏子宫及对胚胎施加过大压力。

(b) 将胚胎与胎膜和胎盘剥离，放在培养皿的另一边，避开血污。

9. 将胚胎转入新的培养皿中，若有大量的胚胎要取（如 4 或 5 窝以上），可将培养皿置于冰上。