戊二醛

戊二醛，可以给组织细胞的细微结果提供最好的呵护，通常可用于电镜和一些免疫荧光实验，比如微管定位。

但是，戊二醛也有矫情的一面，它常可导致免疫表位的改变，这让抗体不得与抗原你侬我侬。有时候可导致一些非特异性荧光的出现。2%的戊二醛在常温下，一个小时可穿透约700微米的组织。

有些实验室会将戊二醛和甲醛联合使用进行组织细胞固定，利用的就是这两种固定剂各有所长。于是出现了下图的斗嘴日常。

这对小冤家听说这样的互补关系可能很棒，于是在媒婆的鼓动下，他们走进了婚姻的殿堂，从此夫妻双双把固定做。

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甲醇/丙酮

冰甲醇或冰丙酮固定速度较甲醛和戊二醛快，也在固定界有所建树。比如，他们可以用于细胞骨架成分的固定。不足之处在于他们在固定的同时会改变一些抗原的位置。另外，由于他俩在固定的同时也会破膜，有些细胞内的可溶性抗原就会在破膜处嗨起来，出去浪，这样一来，如果你要检测的刚好是这些可溶性抗原，那么，结果就不好说了。再者，由于固定同时会发生脱水，所以组织细胞可能会发生皱缩，不再维持原本水灵灵的模样。

在使用上述各种固定剂时，需要注意的是，固定时间与切片厚度和固定剂的特点相关，不同固定剂所需固定时间和浓度不同。如果固定时间不够，可导致细胞形态保存不佳，失去细胞本来的面貌，或失去我们想检测的令我们心动的信号。然而，固定过度也可能导致失去想要检测的信号，或在出现更多非特异性的背景信号，这无疑会影响你切片的美。

破膜剂界的精英

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Triton X-100, NP-40和Brij-58

常用的破膜剂有Triton X-100, NP-40和Brij-58。他们都能通过溶解磷脂膜，让抗体和抗原破除膜的阻挠，千里相会，成就一段美好姻缘。通常情况下，在常温或冰上以浓度0.1%-0.5%作用5分钟左右即可，这些破膜剂通常在固定后使用。但是，有些实验室建议固定和破膜同时进行，所以会把固定剂和破膜剂混在一起使用。还有些实验室建议先破膜后固定。笔者试过先固定后破膜，以及同时固定破膜，效果都较理想。

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皂苷

皂苷较上述三种常用破膜剂，对细胞膜的损害较小，通过溶解膜的胆固醇起到破膜作用。这个皂苷很有意思，如果你选择用他，那么，见证奇迹的时刻都要有他，即在抗体孵育阶段以及洗涤阶段他都需在场，因为如果不在场呢，破掉的膜就复原封闭了。正是由于皂苷这个温和的特点，他可用于细胞膜结构比较重要的研究。常在室温情况下使用浓度0.5%即可。

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洋地黄皂苷

洋地黄皂苷有一技之长，他可通过结合胆固醇和其他beta-羟基类固醇选择性地只破细胞膜，原因在于其他膜的胆固醇含量较细胞膜少。常在室温情况下用浓度50ug/ml作用5分钟即可。但针对不同细胞，使用洋地黄皂苷的浓度时间可能不同，这个需要实验者在实验过程中探索。他可以用于核转运实验。

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甲醇或丙酮

甲醇或丙酮不仅可以用于固定，也可用于破膜，因为他们的固定和破膜是同时进行的，传说中的荡起双桨就是这个啦。通常用于破膜的温度在-20度到14度之间。如果研究细胞内主要蛋白系统的话，这两种试剂一步到位地固定和破膜功能非常有用。比如研究含肌动蛋白的应力纤维和中间纤维网络等。但是如果要研究不那么稳定的细胞内抗原，这两种破膜剂可能并非首选。

综上所述，固定剂与破膜剂各有其特点。通常情况下，很多实验室中以甲醛作为常用固定剂，以Triton X-100作为常用破膜剂。在实际实验操作过程中，应根据实验目的，结合各种固定剂和破膜剂的特点，决定该使用的固定剂和破膜剂的种类。充分发挥各种固定剂和破膜剂的长处，避其所短，才能让实验结果更漂亮。

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