植物线粒体总蛋白提取试剂盒50 次品牌品牌:上海研生进口/国产

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植物线粒体总蛋白提取试剂盒50 次品牌品牌:上海研生进口/国产

2022-05-23 04:19| 来源: 网络整理| 查看: 265

植物线粒体总蛋白提取试剂盒50 次品牌详细说明:

植物线粒体总蛋白提取试剂盒50 次品牌试剂的取用规则: (1)试剂不能与手接触。 (2)要用洁净的药勺,量筒或滴管取用试剂,*不准用同一种工具同时连续取用多种试剂。取完一种试剂后,应将工具洗净(药勺要擦干)后,方可取用另一种试剂。 (3)试剂取用后一定要将瓶塞盖紧,不可放错瓶盖和滴管,绝不允许张冠李戴,用完后将瓶放回原处 (4)已取出的试剂不能再放回原试剂瓶内。 植物线粒体总蛋白提取试剂盒50 次品牌主要特点是: 1.非冻保存提取RNA用的新鲜组织,在37℃下可保存1天,25℃下可保存1周,4℃下可保存1月,在-20℃或-80℃下可长期保存。其间样品可反复冻融十多次。 2.应用范围广,可用于保存,邮寄和运输病毒、***、果蝇、植物组织、动物组织、培养细胞、悬浮细胞(白细胞、流式细胞仪收集的细胞)等。 3.兼容性广,RNALOCKER保存的样品可以直接用于RNA提取也可直接用于组织切片、免疫学和流式细胞分析。 4.结果准确,本产品进入细胞后能迅速锁定RNA水平,使实验结果更能准确反映取样时基因表达谱的真实状态。 使用及效果: 迅速将新鲜组织剪薄(0.5厘米以下)并按每克组织加10 mL RNALOCKER的比例浸没在适量RNALOCKER中,在适当温度保存即可。 植物线粒体总蛋白提取试剂盒50 次品牌实验步骤 (1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul) (2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀 (3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次 (4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min) (5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min) (6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜) (7)10,000rpm,4℃离心20min (8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀 (9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min) (10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上 (11)12,000rpm,4℃离心20 min (12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥 (13)加200ul的DEPC处理水溶解 (14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量 (在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数) HEC-1-B(人子宫内膜腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2

恒河猴肾细胞;LLC-MK2

CDH2 Others Mouse 小鼠 N-Cadherin / CD325 / CDH2 人细胞裂解液 (阳性对照)

RKO-E6细胞,人转基因细胞 人侵袭性脉络膜细胞,M619细胞 人耐VP16绒癌细胞株;JEG-3/VP16

人脐带间充质干细胞RNAHUMSC miRNA5 μg

ALPL Others Human 人 ALPL / TNAP 人细胞裂解液 (阳性对照) 人表皮黑色素细胞-浅色素RNAHEM-l miRNA5 μg

VASN Others Human 人 VASN / Vasorin 人细胞裂解液 (阳性对照)

人脐动脉平滑肌细胞完全培养基 100mL

3T3细胞,小鼠成纤维细胞 COLO 205(细胞) 人肾透明细胞癌;Caki-1

CSF2 Protein Mouse 重组小鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (His 标签)

T-47D(人管癌细胞) 5×106cells/瓶×2 甲型 H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人细胞裂解液 (阳性对照) HEC-1-B(人子宫内膜腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2

恒河猴肾细胞;LLC-MK2

CDH2 Others Mouse 小鼠 N-Cadherin / CD325 / CDH2 人细胞裂解液 (阳性对照)

RKO-E6细胞,人转基因细胞 人侵袭性脉络膜细胞,M619细胞 人耐VP16绒癌细胞株;JEG-3/VP16

人脐带间充质干细胞RNAHUMSC miRNA5 μg

ALPL Others Human 人 ALPL / TNAP 人细胞裂解液 (阳性对照) GAMBroth,Modified

RPMI 1640,(1X),液体(IVD) 含L-谷氨酰胺 11875-093 500ml incubation media RPMI 1640,(1X),液体(IVD) 含L-谷氨酰胺 11875-093 500ml

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氯营养琼脂 250g 用于霍乱弧菌传代培养或 植物线粒体总蛋白提取试剂盒50 次品牌注意事项 1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。 2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后,轻摇时胰酶与细胞充分接触,然后倒掉大部分胰酶,利用剩余的少量胰酶再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。 3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定前需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。 4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。 5) 试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。

 



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