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即使在CRISPR基因编辑技术出现之后，哺乳动物突变体的构建也一直是一个很令人头疼的事情，因为经常拿到的是嵌合突变体，在F0代拿到纯合突变体的概率极低。最近上海生科院神经所的杨辉老师组在Cell

Research杂志上报道了基于多种gRNA组合的方法实现以接近100%的效率在F0拿到纯合突变体的工作。该工作的示意图如图1所示：首先就是在一个区域选择合成多条gRNA和Cas9 mRNA通过显微注射进入受精卵，然后随着gRNA条数的增多，得到纯合突变体的效率便会接近100%。图1选择了负责合成黑色素的关键基因Tyr来敲除，当gRNA组合数目达到三个及以上的时候，编辑效率就直逼100%，简直很暴力。

图1来源:[1]

除此之外，他们还实现了小鼠中一步三敲以及在猴子中实现高效率基因编辑等工作。其实杨辉研究员去年就已经在成都的CBIS会议上介绍过这个工作，只不过当时没有介绍原理，如今看来，其中的技巧真是够暴力。

脱靶效应当然会出现，理论上多个gRNA也会使得脱靶更容易出现，但是这个方法这么有效，就忍了呗，实在不行把得到的突变体挨个前基因组测序检测检测，反正以后造突变体又快又高效。

然后还有一点点的碎碎念，高级研究员开会的意义就在于先外行一步看到同行在做啥，做的怎么样？这样就产生了相对于外行的信息不对称优势，所以内行普遍更有竞争力啊，人家知道的早啊。还有地理上产生的信息不对称，做科研就要去牛人扎堆的地方（比如波士顿），因为随便一个博士答辩可能就是几个月之后的CNS cover.

参考文献：

1. Zuo E, Cai YJ, Li K, et al. One-step generationof complete gene knockout mice and monkeys by CRISPR/Cas9-mediated gene editingwith multiple sgRNAs[J]. Cell Research, advance onlinepublication 6 June 2017; doi: 10.1038/cr.2017.8