牛肉膏蛋白胨培养基制备实验 |
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牛肉膏蛋白胨培养基制备实验
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一、称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放人烧杯中，牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒人烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放人水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。 蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。 二、溶化 在上述烧杯中先加人少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，或在磁力搅拌器上加热溶解（图1）将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积，如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分，在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1.5%-2.0%的量将琼脂直接分别加人各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间。
五、分装 1. 按实验要求，可将配制的培养基分装人试管内或三角烧瓶内。分装装置见图2。
图2 培养基分装装置
A. 漏斗分装装置；B. 自动分装器
1. 铁架；2. 漏斗；3. 乳胶管；4. 弹簧夹；5. 玻管；6. 流速调节；7. 装量调节；8. 开关
2. 液体分装分装高度以试管髙度的1/4左右为宜。分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，如果是用于振荡培养用，则根据通气量的要求酌情减少；有的液体培养基在灭菌后，要补加一定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量一定要准确。 3. 固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 4. 半固体分装试管一般以试管髙度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。 分装过程中，注意不要使培养甚沾在管（瓶）上，以免沾污棉塞而引起污染。 六、加塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等)，以阻止外界微生物进人培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 七、包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞， 其外再用一道麻绳扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、配制曰期（有条件的实验室，可用市售的铝箔代替牛皮纸，省去用绳扎，而且效果好。） 八、灭菌 将上述培养基以0.103 MPa，121℃，20 min高压蒸气灭菌。 九、搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多），将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜（图3）。
图3 摆斜面 十、无菌检查 将灭菌培养基放人37 ℃的温室中培养24-48 h，以检査灭菌是否彻底。 |
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