1、SNS抑制CUMS诱导的乳腺癌生长和转移

研究首先建立了携带乳腺癌的小鼠CUMS（Chronic unpredictable mild stress）模型，经过7天的慢性心理压力刺激后，雌性小鼠注射1 × 106乳腺癌细胞，同时每天一次灌胃SNS悬浮液或生理盐水（图1A）。结果发现，SNS给药显著改善小鼠的抑郁状态（图1B），CUMS显著加快肿瘤生长速度，而SNS抑制CUMS诱导的肿瘤生长和肺转移（图1C）。

图1 SNS抑制CUMS诱导的肿瘤生长和肺转移

2、SNS抑制FXR/HNF4α导致的雌二醇升高

研究通过LC-MS分析发现SNS治疗可以显著降低CUMS诱导的肝脏中的雌二醇水平的增加（图2A），且胆酸合成是受CUMS和SNS处理影响的主要途径（图2B）。进一步检测肝脏中EST（雌激素磺基转移酶，调控雌二醇水平）和胆酸受体FXR的表达，发现CUMS明显增强FXR的表达，抑制EST的水平，而SNS治疗起到相反的效果（图2C）。结果表明SNS抑制FXR/HNF4α/EST信号传导导致的胆酸和雌二醇升高。

图2 SNS抑制FXR/HNF4α/EST进而抑制雌二醇升高

3、柚皮素作为SNS发挥功能的活性化合物

为了确定SNS促进雌二醇代谢的有效成分，研究采用HPLC-MS/MS法对配方中的化合物进行分析，共确认173种植物化学物质。通过与体内代谢物交叉，最终确定72种源自SNS的外源性化合物为潜在的活性成分。进一步对前10种丰度较高的化合物进行EST荧光素酶报告基因筛选实验，发现柚皮素、鞣花酸和金丝桃素在触发EST转录方面表现出显著活性，而柚皮素是SNS中最具生物活性的化合物（图3A、3B）。此外，功能分析表明柚皮素可以剂量依赖性地抑制胆酸诱导的FXR表达，诱导EST的升高（图3C）。结果表明柚皮素是负责SNS雌激素调节活性的物质基础。

图3 柚皮素作为SNS的活性化合物

4、柚皮素通过FXR/HNF4α抑制乳腺癌转移

最后，研究建立了斑马鱼乳腺癌异种移植模型，验证了柚皮素在体内的抑制乳腺癌和雌二醇调节作用，确定了柚皮素可以通过FXR/EST通路调节雌二醇代谢，抑制斑马鱼乳腺癌异种移植模型中的乳腺癌生长和转移（图4A）。为了进一步验证柚皮素对CUMS介导的乳腺癌生长和转移的体内抑制作用，研究建立了小鼠乳腺癌异种移植模型，发现柚皮素可以通过FXR/EST途径促进雌二醇代谢，从而抑制CUMS介导的乳腺癌生长和肺转移（图4B）。

图4 柚皮素通过FXR/HNF4α/EST抑制乳腺癌肺转

总结与讨论

中药复方的疗效很多都是明确的，但其活性成分和作用靶点大部分都不是很明确。该案例给我们的中药复方研究提供了一个很好的思路：

1）动物实验确定中药复方的疗效；

2）确定中药复方的作用机制及核心蛋白；

3）明确中药复方的活性成分；

4）动物实验验证该活性成分的疗效及相同机制；

在确定药物活性成分及作用靶点的时候，研究采用的是荧光素酶报告基因筛选实验，发现复方四逆散中特定组分柚皮素能够显著促进关键蛋白EST的表达，从而确定了柚皮素作为四逆散中调节FXR/HNF4α/EST通路的活性化合物。如果采用DARTS，Pull down、SPR进行进一步发现并验证柚皮素直接作用靶点，文章内容将更加丰富。

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4) 小分子靶点筛选：20K芯片，DARTS，Pull down+质谱

5）药物调控信号通路筛选：磷酸化抗体芯片，蛋白质组学

6）网络药理学与计算机分子对接

7）SPR表面等离子共振（分子动力学）

相关文献

Zhang J, Wang N, Zheng Y, et al. Naringenin in Si-Ni-San formula inhibits chronic psychological stress-induced breast cancer growth and metastasis by modulating estrogen metabolism through FXR/EST pathway. J Adv Res. 2022 Jun 16:S2090-1232(22)00145-X.返回搜狐，查看更多