产品信息

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价格

促销价

Puromycin   (Solution 10 mg/mL) 嘌呤霉素盐酸盐溶液

60209ES10

1×1   mL

415

 /

60209ES50

5×1   mL

1,495

 /

60209ES60

10×1   mL

2,385

1,585

60209ES76

50×1   mL

7,985

5285

产品描述

嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3´末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC)，赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。

嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

本品是无菌的、溶于蒸馏水的嘌呤霉素盐酸盐溶液，浓度为10 mg/mL（10 mg/mL in H2O），可直接用培养基或其他缓冲溶液稀释使用，适用于细胞培养，常用工作浓度为1~10 µg/mL。

产品性质

CAS号（CAS NO.）

58-58-2

分子式（Formula）

C22H29N7O5·2HCl

分子量（Molecular weight）

544.43   g/mol

外观（Appearance）

溶液

浓度   （Concentration）

10   mg/mL（溶于水）

纯度（Purity）

≥98%

结构式（Structure）

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年，避免反复冻融。

使用方法

1. 建议使用浓度

哺乳动物细胞：1~10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定。推荐浓度，请看表1。

大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125 μg/mL。

【注】：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。

表1 嘌呤霉素盐酸盐的推荐浓度

细胞系

嘌呤霉素浓度

参考文献

B16（小鼠黑素细胞）

1~2 μg/mL

【1】,【2】

HEK293（人胚胎肾细胞）

0.5~10 μg/mL

【3】

HeLa（人宫颈癌细胞）

1~10 μg/mL

【4】，【5】

MEF（小鼠成纤维细胞）

1-5 μg/mL

【4】

HepG2（人肝细胞癌）

0.5~5 μg/mL

【6】，【7】

A549（肺癌细胞）

1.5 μg/mL

【8】

人胚胎干 (ES) 细胞

0.5~5 μg/mL

【9】

2. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）

嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线(kill curve)。

1）Day 1：24孔板内以5~8×104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔，以确保后续的梯度实验的进行，37℃细胞孵育过夜。

2）Day 2：①准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0~15 μg/mL，至少5个梯度）；②往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞。

3）Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。

4）根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基。

5）每日监测细胞，观察存活细胞率，确定抗生素筛选开始4~6天内有效杀死非转染或所有非转导细胞的药物最低浓度。

3. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选

等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。

1）细胞转染48 h后，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。

【注】：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。

2）每隔2~3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。

3）筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。

【注】：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48 h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。

4）转移和放置5~10个抗性克隆到一个35 mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。

注意事项

1. 嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 本产品仅作科研用途！

参考文献

【1】Furge KA. et al., 2001. Suppression of Ras-mediated tumorigenicity and metastasis through inhibition of the Met receptor tyrosine kinase. PNAS 98:10722-7.

【2】Díaz J. et al., 2014.Rab5 is required in metastatic cancer cells for Caveolin-1-enhanced Rac1 activation, migration and invasion.. J Cell Sci. 127:2401-6.

【3】Rössger K. et al., 2013. Reward-based hypertension control by a synthetic brain-dopamine interface. PNAS, 110:18150-5.

【4】Kamer I. et al., 2005. Proapoptotic BID Is an ATM effector in the DNA-damage response Cell. 122:593-603.

【5】Charnaux N. et al., 2005. RANTES (CCL5) induces a CCR5-dependent accelerated shedding of syndecan-1 (CD138) and syndecan-4 from HeLa cells and forms

【6】Gao J , Zhao N , Knutson M D , et al. The Hereditary Hemochromatosis Protein, HFE, Inhibits Iron Uptake via Down-regulation of Zip14 in HepG2 Cells[J]. Journal of Biological Chemistry, 2008, 283(31):21462-8.

【7】Huang J , Dibble C C , Matsuzaki M , et al. The TSC1-TSC2 complex is required for proper activation of mTOR2[J]. Molecular and Cellular Biology, 2008, 28(12):4104-4115.

【8】 Nasser M W , Datta J , Nuovo G , et al. Nasser MW, Datta J, Nuovo G, Kutay H, Motiwala T, Majumder S, Wang B, Suster S, Jacob ST, Ghoshal KDown-regulation of micro-RNA-1 (miR-1) in lung cancer. Suppression of tumorigenic property of lung cancer cells and their sensitization to doxorubicin-induced apoptosis by miR-1. J Biol Chem 283: 33394-33405[J]. Journal of Biological Chemistry, 2008, 283(48):33394-33405.

【9】Paatero A O , Hilkka T , Happonen L J , et al. Bacteriophage Mu integration in yeast and mammalian genomes[J]. Nucleic Acids Research, 2008, 36(22):e148-e148.

客户使用本产品发表的科研文献（部分） 

[1] Zhang D, et al. A non-canonical cGAS-STING-PERK pathway facilitates the translational program critical for senescence and organ fibrosis. Nat Cell Biol. 2022 May;24(5):766-782. doi: 10.1038/s41556-022-00894-z. Epub 2022 May 2. PMID: 35501370.  (IF: 28.824)

[2] Lu T, et al. CD73 in small extracellular vesicles derived from HNSCC defines tumour-associated immunosuppression mediated by macrophages in the microenvironment. J Extracell Vesicles. 2022 May;11(5):e12218. doi: 10.1002/jev2.12218. PMID: 35524455; PMCID: PMC9077142.  (IF: 25.841)

[3] Chen S, et al. Identification of ubiquitin-specific protease 32 as an oncogene in glioblastoma and the underlying mechanisms. Sci Rep. 2022 Apr 19;12(1):6445. doi: 10.1038/s41598-022-09497-y. PMID: 35440702; PMCID: PMC9018837.  (IF: 4.38)

[4] Han L, et al. Uterus globulin associated protein 1 (UGRP1) binds podoplanin (PDPN) to promote a novel inflammation pathway during Streptococcus pneumoniae infection. Clin Transl Med. 2022 Jun;12(6):e850. doi: 10.1002/ctm2.850. PMID: 35652821; PMCID: PMC9161880.  (IF: 11.492)

[5] Sun Q, et al. MORTALIN-Ca2+ axis drives innate rituximab resistance in diffuse large B-cell lymphoma. Cancer Lett. 2022 Jul 1; 537:215678. doi: 10.1016/j.canlet.2022.215678. Epub 2022 Apr 18. PMID: 35447282.   (IF: 8.679)

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HB220729