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介绍
脾脏是一个是造血、红细胞清除和免疫功能的器官，因此是细胞的良好来源。它会过滤掉细胞碎片、病原体和不正常的细胞，是红细胞和白细胞以及多种免疫细胞亚型（包括粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞（DC）、NK 细胞、T 细胞和 B 细胞）的来源。白细胞可通过脾细胞粗分离得到。在脾细胞粗分离中，细胞释放酶消化组织从而得到 DC 和巨噬细胞。 材料
红细胞（RBC）裂解液（例如 eBioscience 10X RBC 裂解缓冲液（多物种），货号：00-4300-54）磷酸盐缓冲液（例如 Gibco PBS (10X)，pH 7.4，货号：70011044）手术刀和刀片细胞培养皿（例如 Thermo Scientific Nunc EasYDish 100 mm 培养皿，货号：150466）一次性移液器（例如 FisherBrand 一次性移液器，货号：137112）50 mL 锥形管（例如 Thermo Scientific Nunc 50 mL 无菌聚丙烯锥形离心管，货号：339652）70 μm 细胞筛网（例如 Fisherbrand 无菌细胞筛网，货号：22-363-548）5–10 mL 注射器（例如 Fisherbrand 10 mL 一次性无菌注射器，货号：14-955-459）Hanks' 平衡盐溶液（例如 Gibco Hanks' 平衡盐溶液，HBSS 10x，货号：14060040） 髓系细胞制备胶原酶（例如 Gibco IV 型胶原酶，货号：17104019）DNase（例如 Thermo Scientific DNase I 溶液，货号：90083）胎牛血清（例如 Gibco 胎牛血清，货号：26140087，或小包装胎牛血清，货号：A3160401）EDTA（例如 UltraPure 0.5M EDTA，pH 8.0，货号：15575020）步骤
在室温下执行步骤 1-7，使用冷的缓冲液在冰上执行步骤 8–12。 获取新鲜的小鼠脾脏。将小鼠脾脏放入含 5 mL HBSS（Hanks' 平衡盐溶液）缓冲液的培养皿中。使用剃刀或手术刀片，小心将脾脏切成小块（~0.2 cm2）。髓系细胞制备如下（接续执行步骤 5，进行粗分离）：在 37°C 下，使用 5 mL 含 IV 型胶原酶（100 U/mL）和 1% FBS 的 DNase（20 µg/mL）的 HBSS 溶液消化小块状的脾脏， 20–30 分钟。 4a.加入 1 mM/mL EDTA，于室温静止 5 分钟，终止酶促反应 将细胞筛网放在 50 mL 锥形管上方。使用一次性移液器，将消化后的脾脏转移到细胞筛网中。使用注射器柱塞端，捣碎或压碎脾脏，使其通过筛网。必要时，加入 5–10 mL PBS冲洗。用大量的 PBS 冲洗细胞，使其通过筛网。如需要，重复步骤 5 和步骤 6。在 4°C 下，以 400-600 x g 离心细胞 5 分钟，丢弃上清液。用 2–5 mL 预冷的 1x RBC 裂解液重悬细胞。将重悬液置于冰上静止 5 分钟。用 10–20 mL 的冰冷 PBS 洗涤细胞悬液。在 4 °C 下，以 400-600 x g 离心细胞 5 分钟，丢弃上清液。用 PBS 重悬细胞，使细胞浓度达 2–3 x 106 个细胞/mL。
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