图片来源于Kwan HY, et al.Sci Rep. 2017（左）；Liu X, et al. Am J Transl Res. 2015（右）

❤ 首先我们要注意以下几点：

1.何时开始分化（细胞密度，图示）

随着细胞数量不断增长，生长空间减少，最后细胞相互接触，停止增殖，这种现象称为接触抑制。当细胞发生接触抑制后48h开始分化最佳【1】。

2.分化后期，成熟脂肪细胞变多后，细胞层容易打卷、漂起来，造成样品损失。

这时换液时需要 轻柔，吸走旧培液时要 轻、慢，避免枪头直接触碰细胞层；加入新培液时用移液器从侧壁 缓慢将液滴加入，防止液体直接冲击细胞层。

分化体系

· 白色化分化体系：以3T3为例

分化轴：Day0长满的脂肪前体细胞加分化液——day2维持液——day4维持液——day6维持液——day7后分化为成熟脂肪细胞。

3

T3-L1细

胞分化油红染色图

图片来自Lu S, Guan Q, Liu Y, et al. Lipids Health Dis.2012

· 棕色化分化体系：以C3为例

分化轴：Day0长满的脂肪前体细胞加分化液——day2换为维持液——day4维持液换液——day6维持液换液——day7后已分化为成熟脂肪细胞。

C3H10T1/2细胞分化油红染色图

图片来自Milet C, Bléher M, Allbright K, et al.Sci Rep. 2017

❤ Tips:

避免污染：

整个分化过程需要7天以上，时程较长，所以整个分化实验过程中注意无菌操作，否则等了那么久，细胞污染了，可就哭都来不及了。

轻

柔换液：

整个分化过程中，都要参考上文方式，轻柔换液，分化后的脂肪细胞容易自行或被冲击力冲击后翻卷脱离皿底，就死翘翘啦 （最惨的是分化的越好的细胞越容易卷

）。

❤ 药物配方：

药物配方Tips：以下举例说明白色成脂分化和棕色成脂分化的试剂配方。实际操作中，针对不同研究需求或操作习惯，不同实验室的脂肪分化液和维持液配方可能有细微区别，但关键配方通常都是针对上期脂肪分化原理（加链接）中提到的分化关键因子的。总之，能让小胖子们长胖的，就是好配方~~

白色分化

：

分化液：胰岛素；曲格列酮；IBMX；地塞米松

维持液：胰岛素

棕色分化：

分化液：胰岛素；T3；IBMX；地塞米松；Indo吲哚；罗格列酮

维持液：胰岛素；T3；罗格列酮

药物小课堂：

具体机制请看第一期哦（传送门 ），这里再带大家简单回顾一下~

① Insulin：胰岛素是脂肪细胞分化所必需的因子，由于脂肪细胞表面胰岛素受体极少，胰岛素通过激活胰岛素样生长因子-1（IGF-1）受体来激活 PI3K/Akt通路。PI3K激活Akt/PKB后导致GLUT1和GLUT4转位到细胞膜，摄取葡萄糖，促进脂肪甘油三酯合成增加，导致脂肪分化。胰岛素还能通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路降低核蛋白磷酸酶的活性，激活CREB的转录，增加 C/EBPα和PPARγ的表达。

② T3：全称为3,3',5-Triiodo-L-thyronine，三碘甲状腺原氨酸，是一种甲状腺激素。T3能促进细胞物质能量代谢，促进前体脂肪细胞分化。T3通过作用于UCP1启动子上的TREs（Thyroid response elements，甲状腺反应元件）， 增强UCP1基因表达，促进脂肪前体细胞向棕色脂肪细胞分化。

③ IBMX：全称为3-isobutyl-methylxanthine，3-异丁基-1-甲基黄嘌呤，是磷酸二酯酶的特异性抑制剂。IBMX可提高胞内cAMP水平，进而激活cAMP反应元件结合蛋白， 调控C/EBPs的表达，促进成脂分化。

④ 地塞米松：Dexamethasone，是一种糖皮质激素，它通过激活糖皮质激素受体（GR）来发挥作用，促进脂肪细胞分化。

⑤ Indo：吲哚美辛（Indomethacin）， 抑制C3细胞向肌细胞分化，促进成脂分化。

⑥ 罗格列酮/曲格列酮： Rosiglitazone/Trogliazone，均是噻唑烷二酮类（TZD）药物的一种，能够降糖，提高胰岛素敏感性。与过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）结合，促进 甘油三酯合成，刺激脂肪细胞分化。而在棕色化分化过程中长期加入 罗格列酮促进PGC1α、Prdm16表达以 维持棕色化状态。

脂肪细胞的外观我们已经亲眼目睹啦~那么在分化过程中细胞内的基因表达又发生了哪些变化呢？接着往下看吧！

分化过程中脂肪细胞基因表达的变化pattern：

3T3-L1不同时期分化相关基因表达变化

图片来自Dijk W, Mattijssen F, de la Rosa Rodriguez M, et al. Endocrinology. 2017

C3H10T1/2不同时期分化相关基因表达变化

图片来自Zhou H, Kaplan ‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍T, Li Y, et al. Elife. 2013

本期的代谢技术——脂肪细胞分化也完结啦，掌握扎实的实验技术是做好实验的基础，本专题我们从脂肪细胞的类型，分化基本原理、细胞分化实验操作方面介绍了脂肪研究的细胞生物学技术，希望对想从事或正在从事代谢研究的小伙伴们有所帮助哟~我们下期不见不散！

【1】Seale P, Kajimura S, Yang W, et al. Tranional control of brown fat determination by PRDM16. Cell Metab. 2007;6(1):38-54.返回搜狐，查看更多