SILAC |
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SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable Isotope Labeling By Amino Acids In Cell Culture,SILAC),其实验原理是在细胞培养基中加入轻、中或重型稳定同位素标记的必需氨基酸(赖氨酸和精氨酸),通过细胞的正常代谢,使新合成的蛋白带上稳定同位素标签。等量混合各类型蛋白质,酶解后进行质谱分析。通过比较一级质谱图中同位素峰型的面积大小进行相对定量,同时二级谱图对肽段进行序列测定从而进行蛋白鉴定。 技术优点 活细胞水平标记技术,标记效果稳定,其标记效率不受裂解液的影响。标记效率较高。 样本需求量少,通常每个样品需要几十微克的蛋白量。 采用质谱定量,可同时鉴定并定量多种蛋白质。 多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定,后续实验对样品的影响是一致的,减少了实验操作和仪器设备产生的影响,具有精密度和重现性。 标记采用的是体内标记技术,接近样品真实状态。 技术平台 Triple TOF 5600, Q-Exactive, Orbitrap Fusion™ Tribrid™ 应用领域: 机理和调控机制研究 动态过程中机制研究 疾病标志物的筛选 用药及预后标志物筛选 |
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