非变性凝胶电泳预制胶

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非变性凝胶电泳预制胶

2024-07-15 19:02| 来源: 网络整理| 查看: 265

NativePAGE Bis-Tris 预制胶工作原理

在常规 SDS-PAGE 中,使用 SDS 作为电荷调节剂。SDS 可以附着在蛋白质上并使其变性,让蛋白质带有负电荷;这样可以让蛋白质向正极迁移。SDS 存在于上样缓冲和电泳缓冲液中。NativePAGE Bis-Tris 预制胶则使用考马斯亮蓝 G-250 附着在蛋白质上,使其带有负电荷,同时保持蛋白质的天然状态,不会使其变性。G-250 存在于阴极缓冲液中,为凝胶提供持续的 G-250 供给,在凝胶上样前,G250也会添加于含有非离子型表面活性剂的蛋白样本中。凝胶中不含任何 G-250。该系统是由 Schägger 和 von Jagow 在蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(BN PAGE)技术的基础上开发而成,具有近中性的操作 pH 和去垢剂兼容性,突破了传统非变性凝胶电泳的限制。

PVDF 是推荐的印迹膜,可用于与 NativePAGE 预制胶一起进行蛋白印迹。硝酸纤维素膜不适用于 NativePAGE 预制胶的转印,因为硝酸纤维素膜与考马斯 G-250 染料结合得非常紧密,并且与用于脱色和固定蛋白质的含酒精溶液不兼容。

G-250 与蛋白质的结合具有以下优势,可实现高分辨率的天然凝胶电泳(Schägger,2001年):

具有碱性等电点(pI)的蛋白质通常带净正电荷,G-250 将蛋白质转换为带净负电荷,从而使蛋白质沿一个方向向阳极迁移。膜蛋白和疏水区域显著暴露于表面的蛋白不易发生聚集,这是因为 G-250 会非特异性地结合到疏水位点上,从而将它们转变为带负电荷的位点。


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