一睹免疫细胞搏杀战场的风采

效应细胞功能鉴定和抗体药物研发之ADCC分析

（Celigo全视野细胞扫描分析仪）

1.    ADCC作用

ADCC作用即抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)：指表达IgGFc受体的NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞等，通过与已结合在病毒感染细胞和肿瘤细胞等靶细胞表面的IgG抗体的Fc段结合，而达到杀伤这些靶细胞的作用。

2.    ADCC作用的关键点

1） 效靶比(E:T)：即效应细胞和靶细胞的比率，是分析ADCC作用的关键因素之一。

2） 抗体浓度：最佳抗体浓度的摸索是ADCC作用的关键因素；

3） 效应时间：最佳效应时间点的摸索也是ADCC作用的关键因素

3.    检测方法：

Celigo全视野细胞扫描分析仪能多时间点图像监测和定量分析效应细胞杀死靶细胞的搏杀战场。

4.    Celigo监测实验流程举例

1）Calcein AM荧光染料：一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂。

Calcein AM能够轻易穿透活细胞膜，进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein(钙黄绿素)留在细胞内，发出强绿色荧光。因为其细胞毒性低，是最适合作为活细胞的荧光探针。

ADCC分析时，活的靶细胞被Calcein标记，发出强绿色荧光；如果靶细胞死亡或裂解，Calcein释放出来，绿色荧光不再存在。因此可以通过Calcein AM荧光的变化，分析效应细胞对靶细胞的杀伤作用。

2）ADCC分析流程：

5.    Celigo成像

1） 0h靶细胞全孔图像

明场图像                       绿色荧光图像                     明场+荧光叠加

2） 0h靶细胞计数图像（取局部图像）

   绿色荧光细胞图像                                            圈定的计数的细胞图像

3） 不同时间点靶细胞计数图像

0h                                                  2h                                                 4h                                                6h

6.    ADCC杀伤公式和杀伤曲线

nCAM+_t0: 0h的Calcein AM阳性数           nCAM+_t: t小时的Calcein AM阳性数

ADCC杀伤曲线

7.    基于Celigo图像的Calcein AM法和LDH释放法对比

8.    不同效靶比(E:T)对ADCC作用的影响

10:1                                                       5:1                                            2.5:1

                        1.3:1                                                0.6:1                                             0.3:1

9.    不同效应时间点搏杀的细胞图像

t=0h

t=2h

t=4h

t=6h

10.  不同抗体浓度搏杀的细胞图像

0g/ml, 6h

100pg/ml, 6h

10ng/ml, 6h

1 µg/ml, 6 h

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