草鱼血清

IgM

蛋白的纯化及抗血清的制备

丁炜东

;

曹丽萍

;

曹哲明

【期刊名称】

《水生生物学报》

【年

(

卷

),

期】

2010(034)001

【摘

要】

采用盐析法、重组蛋白

A(HiTrap rProteinA Sepharose)

亲和层析法分

离纯化草鱼血清中的

IgM,

并通过

SDS-PAGE

及

Western-blot

技术对纯化蛋白的

部分特性进行分析比较并制备兔抗

IgM

抗血清

.

结果表明

:33%

硫酸铵溶液可以沉淀

血清中大部分蛋白

,

但电泳条带仍较多

,

其中含有

78 kD

和

28 kD

的条带

,

因此仅可

作为免疫球蛋白粗提的方法

;

而

rProteinA

亲和层析法所提蛋白则仅有上述重链

(78 

kD)

和轻链

(28 kD).Western-blot

显示

,

鼠抗人

Ig

抗体可与

78 kD

及

28 kD

条带

发生发应

.rProteinA

亲和法提纯蛋白的纯度较高

,

但含量较低

.

条带较淡

,

仅可作为实

验室小量提纯草鱼

IgM

的有效方法

.

将提纯的蛋白免疫实验兔后可制得效价高达

1:25600

的兔抗鱼

IgM

血清

,

并测得血清蛋白总量和

IgM

含量分别为

25.87 mg

和

4.5 mg,IgM

占血清蛋白总量的

17.39%.

本实验所采用的蛋白

A

亲和层析法提

取草鱼血清

IgM

可以方便、快捷地获得高纯度的产物

,

适合在实验室中纯化鱼类

lgM.

同时本研究所制备的兔抗草鱼

IgM

血清也为今后的相关研究工作打下基础

.

【总页数】

6

页

(P164-169)

【作

者】

丁炜东

;

曹丽萍

;

曹哲明

【作者单位】

中国水产科学研究院淡水渔业研究中心

,

农业部水生动物遗传育种和

养殖生物学重点开放实验室

,

无锡

,214081;

中国水产科学研究院淡水渔业研究中心

,

农业部水生动物遗传育种和养殖生物学重点开放实验室

,

无锡

,214081;

中国水产科