细胞划痕实验的基本原理是：在单层生长的细胞上人为制造一个空缺区域，称之为划痕或者伤口，经过后续的培养过程，划痕边缘的细胞会通过迁移作用逐渐移入空缺区域，使空缺区域变小甚至闭合，通过不同时间点记录的图像进行对比，可以对细胞的迁移能力进行定量评估。

由于其与伤口的愈合过程类似，也称之为伤口愈合实验（wound healing assay）。

Part.1 划痕实验常见的统计指标

①细胞迁移率：可以用划痕面积和划痕宽度两种方式计算：

细胞迁移率=(初始划痕面积-最终划痕面积)/初始划痕面积×100%；

细胞迁移率=(初始划痕宽度-最终划痕宽度)/初始划痕宽度×100%；

②划痕平均宽度：可以用划痕面积和划痕高度计算：

划痕宽度平均值=划痕面积/高度

Image J 直接测量划痕面积和划痕高度都非常方便，但是直接测量划痕宽度有点麻烦！本文分享的是用Image J直接测量划痕面积和划痕高度，有了面积和高度，也就能直接得出划痕平均宽度了！

Part.2 标尺校正设置

如果想要测量实际的长度、面积等信息，就必须重新设置Image J长度单位。

这一步骤需要参考图像自带的标尺，进行比例尺校准 。

如下图红框内所示：Image J默认得到的长度单位为pixel（像素），面积单位为平方像素（pixel2）。

标尺校正的本质，其实就是要知道图像的一个pixel对应的实际长度是多少；以及图像的一个pixel2对应实际面积是多少。

找一张已经加过比例尺，且同样放大率的图片来进行比例尺校准。

在Image J内打开这张图片，工具栏选择直线工具，在标尺上沿着标尺画一条直线。

设置比例，点击Analyze→Set Scale；

在弹出的对话框内点击Click to Remove Scale；

按照上面我们的那张图上比例尺来设置，Known distance填250，Unit of length填入单位（μm）；选择Global为对之后打开的图片都有效（必选项）。

Part.3 划痕面积分析

转化灰度图：Image→Type→8-bit；

增强对比：点击Process→enhance contrast；

Saturated pixels中选择0.3，默认Normalize；之后点击OK；

平滑边缘：Process→Smooth（快捷键Ctrl+shift+S）

寻找边缘：Process→Find Edges；

阈值设定：Image→Adjust→Threshold（快捷键Ctrl+shift+T）

设置和选择：选中为红色，调节阈值为0-20。之后点击Apply；

选择工具栏中的魔棒工具，在划痕面积处点击就能选中。

弹出的Wand Tool中的Tolerance选择2，点击OK。

菜单栏Anlyze-Measure，即可得到划痕面积。

从划痕面积的变化计算细胞迁移率：

细胞迁移率=(0h划痕面积-48h后划痕面积)/0h划痕面积×100%

Part.4 划痕平均宽度

点击【工具栏】中的直线选择工具，纵向画一条笔直的线。

快捷键Ctrl+M，可以得到划痕高度。

根据以上测量出来的划痕面积以及划痕高度，就可以得出划痕宽度平均值了：

划痕宽度平均值=划痕面积/划痕高度

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