两步装填：首先以低流速完成填料的沉降，然后在第二步中以更高的流速或恒定的压力进行填料的压缩。

恒压装填：以恒定压力将胶悬液通过装柱工作站喷进层析柱内，当填料距离装柱目标高度一定距离时停止喷胶，填料会自动反弹到目标装柱高度。

轴向压缩装填：先以恒定流速让填料在层析柱内形成稳定柱床，然后按照装柱因子将柱头下降至目标装柱高度。

（4）装柱成功的关键因素

A．层析柱调水平

B. 层析柱上下筛网无气泡

C．胶悬液浓度控制在50%-60%

D．了解填料装柱因子和关键装柱参数

2.2装柱流程

图1装柱过程

不同的填料对装柱的压力和装柱条件都有一定的要求，现汇总如下表2和表3。

表2 不同填料对装柱的压力要求

表3 不同填料装柱方法汇总（其他填料可参考）

3

柱效测定

柱效测定主要分为丙酮法和氯化钠法，两种测试方法的结果比较类似，可根据实际需求择一测定即可。

表4 柱效测定溶液和方法

一般，柱效会直接影响到试验结果。好的柱效能够保证液体均一流过层析柱，保证样品经过柱子产生尖锐而狭窄的峰，提供良好的分辨率。

图2 柱效测定示意图

AKTA 中Unicorn 软件具备功能完善的数据管理、权限分级、审计追踪和电子签名功能，利用该软件实现层析柱装填效果的判定。

柱效标准：

①h ≤ 3；

②0.8 < As< 1.8。

表5 不同填料性质和柱效要求

4

装柱过程中遇到的问题

①对称性不好，如何解决？

表6 填料装填对称性不好的解决措施

②不同的装柱缓冲液会影响填料的哪些参数？

在不同的装柱缓冲液中，填料的压缩因子也会不同。通常填料在水和20％ 乙醇中均可快速沉降。添加一定的盐会减慢填料沉降的速度，但同时也可以帮助填料不会压得过于紧实。

表7 常见几款填料的压缩因子

5

展望

从实验室规模到大生产规模，层析柱的装填原理一样，但在线性放大的过程中，工业层析柱的选择需要考虑柱壁效应、分布效果、卫生性设计、化学耐受性等众多因素。如果采用自动化程度高的新一代全自动智能轴向压缩层析柱，装柱工作站内置Cytiva各种填料的装柱因子和装柱参数，通过直观的向导模式指导装柱过程，可以避免对人员的依赖性，同时可以减少装柱不平整，污染等问题。因此，随生物制药行业的飞速发展，企业对自动化程度的需求越来越高，较传统的开放式的装填方式也发展到更加方便的在位装填（工作站在线吸胶）。而Cytiva的 Axichrom 系列层析柱，可以很好的满足以上的需求，它采用轴向压缩的方式，独有的专利技术US7534345B2专门的清洁设计支持清洁验证，为层析工艺的放大保驾护航。

为了给大家带来更多装柱干货知识，生物制品圈特邀请Cytiva工艺开发市场经理马志宇老师带来直播讲座：解锁从实验室到产业化，层析柱装填的技巧与方法。

分享主题

解锁从实验室到产业化，层析柱装填的技巧与方法

分享时间

2020年5月13日 20:00

讲座提纲

实验室层析柱装填的一般流程

产业化层析柱装填的考虑因素

新一代实验室和产业化层析柱的选择

讲者介绍

马志宇，Cytiva市场经理， 曾担任生物工艺开发应用专家，资深下游层析介质产品专家，以及实验室工艺开发平台，生物制药行业的解决方案经理，在生物制品行业有13 年的经验积累。

报名方式

阅读原文”，登记信息即可在直播前获取地址。

直播期间会有多位层析装填技术专家同步在线答疑，全方位立体化直播，机会不容错过，快来报名吧。

实验室与产业化层析柱示图

参考文献

1.GE Healthcare. AxiChrom™ columns, Data file 28-9290-41 AJ.

2.BPG Columns Instructions for use 18-1170-70 Edition AC. GE Healthcare.

3.GE Healthcare. Column efficiency testing.28-9372-07.

版

权

声

明

版权为生物制品圈所有。欢迎个人转发分享。其他任何媒体、网站如需转载或引用本网版权所有内容须获得授权且在醒目位置处注明“转自：生物制品圈”。返回搜狐，查看更多