1.硅胶柱色谱

主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙醚化）的黄酮及黄酮醇类。

少数情况下，在加水去活化后也可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。

供试硅胶中混存的微量金属离子，应预先用浓盐酸处理除去，以免干扰分离效果。

2.聚酰胺柱色谱

吸附原理：氢键吸附。

吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中酚羟基的数目与位置等及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。

洗脱规律：

以含水流动相（水-乙醇）做洗脱剂，黄酮苷比游离黄酮先洗脱下来。

（1）苷元相同，洗脱先后顺序一般是：叁糖苷，双糖苷，单糖苷，苷元。

（2）母核上羟基越多，吸附越强，越难洗脱。

（3）聚酰胺对处于羰基间位或对位的羟基吸附力大于邻位羟基，故洗脱顺序为：具有邻位羟基黄酮，具有对位（或间位）羟基黄酮。

（4）不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是：异黄酮，二氢黄酮醇，黄酮，黄酮醇。

（5）分子中芳香核、共轭双键多者易被吸附，故查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。

3.葡聚糖凝胶柱色谱

凝胶型号：Sephadex-G型及Sephadex LH-20型

分离机理：分离游离黄酮——吸附作用（酚羟基越多，吸附越强，越不容易洗脱）

分离黄酮苷——分子筛（分子量越大，越容易洗脱）

常用洗脱剂：

（1）碱性水溶液（如0.1 mol/L NH40H），含盐水溶液（0.5 mol/L NaCl等）。

（2）醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水（不同比例），t-丁醇-甲醇（3：1）、乙醇等。

（3）其他溶剂：如含水丙酮、甲醇-三氯甲烷等。

（二）pH梯度萃取法

酸性由强至弱的顺序

7，4′-二OH＞7-或4′-0H＞一般酚羟基＞3或5-OH

NaHCO3Na2CO30.2%NaOH 4%NaOH

（三）根据分子中某些特定官能团进行分离

有邻二酚羟基的成分可被乙酸铅沉淀，不具有邻二酚羟基的成分可被碱式乙酸铅沉淀，据此可将两类成分分离。

具有邻二酚羟基的黄酮可与硼酸络合，生成物易溶于水，借此也可与不具上述结构的黄酮类化合物相互分离。

重要考点

1、熟悉游离黄酮与黄酮苷的溶解性；

2、黄酮类化合物提取与分离的方法都有哪些（记住方法名称）；

3、碱提酸沉的操作及注意事项（如果具有邻二酚羟基，要加硼酸保护）；

4、聚酰胺柱色谱的吸附规律（出峰顺序）；

5、pH梯度萃取的分离顺序（记住酸性与结构的关系）。返回搜狐，查看更多