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作者：

王莉莉

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摘要：

目的:幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)为革兰氏阴性,微需氧的弯曲状杆菌.根除Hp可有效缓解胃粘膜炎性反应,有助于治愈溃疡,预防消化性溃疡病的复发及缓解胃MALT淋巴瘤;早期根除Hp可以在一定程度上降低胃癌发生的风险.Hp耐药性具有明显的地区差异,本研究通过观察分析青岛地区临床分离Hp菌株对甲硝唑,克拉霉素和左氧氟沙星抗生素的单一耐药和多重耐药情况,探讨Hp耐药与良,恶性慢性胃病和菌株毒力基因型的相关性,并分析耐药基因rdx A,23S r RNA和gyr A的突变特征.方法:从胃窦粘膜标本分离培养Hp,经细菌菌落形态学,酶学试验,革兰氏染色及16S r RNA序列分析鉴定菌株;应用琼脂稀释法药敏试验分别检测Hp菌株对甲硝唑,克拉霉素和左氧氟沙星的敏感性;应用PCR方法检测Hp毒力基因型(cag A和vac A),分析Hp菌株耐药与毒力基因型的相关性;采用测序技术对Hp甲硝唑耐药基因rdx A,克拉霉素耐药基因23S r RNA和左氧氟沙星耐药基因gyr A的PCR产物核苷酸序列进行分析,采用DNAMAN软件对耐药基因突变特征进行序列比对分析.结果:1.本研究共分离出101个Hp菌株,并且经菌落形态学,酶学试验,革兰氏染色及16S r RNA序列分析鉴定后证实.2.药敏检测结果发现,仅17.8%(18/101)Hp菌株对甲硝唑,克拉霉素和左氧氟沙星三种抗生素均敏感.临床分离的Hp菌株对甲硝唑,克拉霉素和左氧氟沙星三种抗生素单一耐药率分别为43.6%,40.6%和34.6%.101株Hp中,有30.1%(31/101)同时对两种或两种以上抗生素耐药.双重耐药的Hp菌株中,克拉霉素+左氧氟沙星耐药率最高,达10.9%(11/101);而左氧氟沙星+甲硝唑耐药率最低,为3.0%(3/101),二者差异有统计学意义(χ2=4.91,P=0.027).这提示青岛地区Hp临床分离株对左氧氟沙星+甲硝唑联合用药最为敏感.Hp临床分离株三重抗生素耐药比例为8.9%(9/101).上述结果表明多重耐药Hp菌株比例在青岛地区较高,这将严重影响临床根除Hp治疗的效果.3.Hp耐药与疾病相关性分析结果发现,胃癌组患者菌株耐药率为33.3%(18/54),明显低于慢性胃炎组菌株(55.3%,26/47),差异有统计学意义(χ2=4.94,P=0.029).本结果提示胃癌及其胃内微环境可能是影响Hp对甲硝唑的耐药的因素.慢性胃炎组Hp菌株对克拉霉素和左氧氟沙星耐药率与胃癌组菌株差异无统计学意义.4.Hp耐药与毒力基因型相关性分析结果可见,毒力基因cag A+以及vac A各亚型在甲硝唑,克拉霉素和左氧氟沙星敏感株与耐药株的分布频率差异无统计学意义.本结果提示Hp毒力基因型与上述三种抗生素耐药无相关性.5.耐药基因序列分析表明青岛地区rdx A基因最常见突变位点为第20核苷酸位点插入A,产生移码突变从而导致第23个氨基酸位点出现终止密码子,引起rdx A基因功能失活,这种情况占总耐药株的43.2%;大多数单核苷酸插入/缺失发生在单核苷酸重复序列位置,占59.1%(26/44),尤以串联重复碱基A多见.23S r RNA基因最常见突变位点为A2143G(78.1%),gyr A基因突变最常见的突变位点为N87K(80.0%).结论:1.青岛地区临床分离Hp菌株呈现为高克拉霉素耐药率和高多重耐药率,因此有必要根据药敏检测结果选择有效的治疗方案.左氧氟沙星可作为本地区根除Hp治疗方案的一线用药.2.本研究首次发现胃癌患者H p菌株的甲硝唑耐药率低,这可能与胃癌患者胃内亚硝酸盐浓度升高有关.3.通过对Hp甲硝唑耐药株rdx A突变位点分析,证实插入/缺失突变最常发生在单核苷酸串联重复序列中.本研究结果对于指导临床治疗,进一步阐明甲硝唑耐药机制提供了新的思路.

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关键词：

胃粘膜炎 幽门螺杆菌 细菌耐药 临床药理

学位级别：

博士

学位年度：

2016