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用途
PCR 说明
本产品是以KOD DNA polymerase为基础开发的高保真性 PCR用酶。在本公司的PCR酶中保真性最高。本酶通过 对Buffer组分的改良及采用热启动方法,与原来的产品 KOD DNA polymerase相比,保真性、PCR效率有了 非常显著的提升。KOD -Plus- Ver.2由于对KOD -Plus- 的Buffer进行了进一步的改良,PCR成功率更高。 特征 ●优良的保真性(本公司同类产品中为第一) KOD DNA polymerase的特点是具有非常高的保真性,而KOD –Plus-的保真性有了更大的提高。大约为Taq DNA polymerase的80倍。最适用于克隆。
●通过热启动提高了PCR反应效率 通过将2种抗KOD单克隆抗体预混在酶中,抑制了常温状态下的多聚酶活性(该活性是产生非特异性反应的主要原因)和3'→5'核酸外切酶活性。抗体在PCR的预变性步骤即发生失活,对扩增反应没有任何影响。 ●延伸性・扩增效率的提高 对反应Buffer的组分进行了优化,使之较以往的KOD DNA Polymerase延伸性・扩增效率均有很大的提高。
●超群的耐热性 因其耐热性比Taq DNA Polymerase更为优良,故可以将热变性步骤的温度设定值提高,对GC含量高,容易形成高级结构的目的片段尤其适用。
●高PCR成功率【KOD -Plus- Ver.2】 对难扩增的目的片段、长目的片段的PCR成功率比KOD -plus-更高。另外,也降低了带入的逆转录反应液对PCR反应的抑制。 实验例 1. 各公司PCR酶的保真性 关于PCR保真性,与其他公司PCR酶相比,可得知KOD -plus-的保真性最高。 该保真性为Taq DNA Polymerase的约82倍。
2. 与其他公司高保真性PCR酶在PCR扩增性能方面的比较 以Human β-globin基因3.6kb为目的片段,用KOD -Plus-及其他公司的高保真性PCR酶进行扩增并比较。 结果可见,与其他公司的High Fidelity酶相比较,KOD -Plus-显示了良好的扩增效果。
3.用各种cDNA为目的片段与其他公司PCR用酶在PCR扩增性能方面的比较 以HeLa total RNA逆转录的cDNA为模板,对4种目的片段进行PCR并比较其效率。 结果可见,与其他酶相比,KOD -Plus- Ver.2显示了良好的扩增效果。特别是对难扩增的6.8kb的目的片段,也能得到明亮的扩增条带。
参考文献 1) J. Mo et al., J. Mol. Biol., 222: 925-936(1991) 2) M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol., 63: 4504-4510(1997) 3) H. Hashimoto et al., J. Biochem.(Tokyo),125: 983-986(1999) 4) H. Mizuguchi et al., J. Biochem.(Tokyo),126: 762-768(1999) 5) H. Hashimoto et al., J. Mol. Biol.,306: 469-477(2001) 6) M. Watanabe et al., J. Biochem.(Tokyo),131: 183-191(2002) 7) H. Terasaki et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 107-112(2002) |
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