林东昊1，茅人飞2

（1.上海师范大学生命科学学院，上海200234；2.上海瀛洲西红花种植专业合作社，上海202155）

摘 要：通过高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法测定藏红花中有效成分西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量；通过紫外-可见分光光度法测定标示藏红花香味强度、芳香度和色度的3 个特征参数，以评价国内外不同来源藏红花的品质。采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为甲醇-水（45∶55，体积比），流速1 mL/min，检测波长 440 nm，柱温 30 ℃。西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ分别在 5.419 μg/mL～108.373 μg/mL（r=1.000 0）和 3.822 μg/mL～76.433 μg/mL（r=0.999 9）范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为99.81%（相对标准偏差为1.50%）和97.47%（相对标准偏差为0.95%）。运用该HPLC 法测定，结果准确、可靠，国内外不同来源藏红花中有效成分含量、品质差异显著。紫外-可见分光光度法测定波长分别为257、330、440 nm，不同来源藏红花的3 个特征参数具有显著差异，分属不同质量等级。

关键词：高效液相色谱法；紫外-可见分光光度法；藏红花；不同来源；西红花苷-Ⅰ；西红花苷-Ⅱ；特征参数

藏红花为鸢尾科植物番红花（Crocus sativus L.）的干燥柱头，又名西红花、番红花，出产于伊朗、希腊、西班牙、印度等地，因最早是由中东地区经西藏传入我国，故而得名藏红花。藏红花是世界著名的天然香料、食用染料，也是名贵的中草药。在我国，藏红花作为食用香辛料和调味品收载于GB/T 12729.1-2008《香辛料和调味品名称》，作为中药材收载于《中华人民共和国药典》一部[1]中。藏红花具有独特的感官特性和品质，具有活血化瘀、凉血解毒、解郁安神等功效。近年来，国内外对藏红花进行了多方面的研究，发现其具有相当广泛的药理作用，能有效清除氧自由基[2-3]；治疗血栓、高血脂、动脉粥样硬化、肝纤维化[4-7]；改善糖尿病和药物等引起的脑功能障碍、认知障碍[8-11]；抑制肿瘤细胞增殖[12-13]；增强骨髓间充质干细胞的成骨分化[14]；改善糖尿病患者的肾功能损害[15]；保护视神经、视网膜[16-17]；抗焦虑抗抑郁[18]；抵抗UVB 引起的皮肤光老化[19]；抗衰老等，在诸多方面显示出了良好的药理活性。藏红花始载于唐代的《本草拾遗》（时名“郁金香”），在我国有着历史悠久的传统食用习惯，中医药典籍中未有毒性记录。藏红花是一朵花中雌蕊的三根柱头，产量极低，每公斤藏红花约有10 万根柱头，故弥足珍贵，有着“植物黄金”之称。在我国，藏红花长期依靠进口，直至20 世纪80年代，上海地区才首先引种成功，之后在江浙等地有零星种植，并逐渐发展。现在藏红花已成为长三角地区高附加值经济作物进行种植。

商品藏红花按照来源不同分为进口花和国产花两大类，气候条件不同，尤其是栽培方式的显著不同，采用“大田培育大球茎，室内培育大花蕊”的二段式栽培模式生产的国产花，其柱头顶端喇叭口大、粗壮、长度25 mm～40 mm，色泽深红；进口花的柱头顶端喇叭口较小、细弱，长度10 mm～25 mm。根据现代化学成分的研究，藏红花含有糖苷、萜类、黄酮、蒽醌等一百多种化合物[20]，其中西红花苷（藏红花素）是其中含量最高的一类活性成分，藏红花质量的优劣与西红花苷的含量密切相关[21]，在国内外通常以西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量来评价藏红花的质量[22]。而在藏红花国际标准（ISO 3632-1：2011）中，以藏红花香味强度（藏红花苦素）、芳香度（藏红花醛）和色度（藏红花素）3 个特征参数作为评价指标，进行藏红花质量分级。本研究参考了《中国药典》一部以及藏红花国际标准（ISO 3632-2：2010）的试验方法，采用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法测定藏红花中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量，采用紫外/可见分光光度法测定藏红花的3 个特征参数，为评价国内外不同来源藏红花的品质提供理论依据。

Agilent 1100 高效液相色谱仪（G1311A 四元泵、G1313A 自动进样器、G1322A 在线脱气机、G1316A 柱温箱、G1314A 紫外检测器）：美国Agilent 公司，GM-0.33Ⅱ隔膜真空泵：天津市腾达过滤器件厂；UV-2600紫外可见分光光度计：岛津仪器（苏州）有限公司；Sartorius BT-124S 电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；Anke TGL-16C 台式离心机：上海安亭科学仪器制造厂；USC-702 超声波清洗器：上海波龙电子设备有限公司。

西红花苷-Ⅰ对照品（批号111588-201202，供含量测定用，含量以91.1%计）、西红花苷-Ⅱ对照品（批号111589-201304，供含量测定用，含量以92.4%计）：中国食品药品检定研究院；蒸馏水：屈臣氏集团；甲醇：色谱纯，美国TEDIA；乙醇：分析纯，江苏强盛功能化学股份有限公司。

藏红花供试品：来源于上海崇明庙镇（1#）、上海崇明建设镇（2#）、浙江湖州（3#）、浙江建德（4#）、江苏南通（5#）、江苏东台（6#）、伊朗 ESFEDAN SAFFRON（7#）、伊朗BADIEE SAFFRON（8#）、散装进口西红花（四川荷花池中药材市场（9#）和安徽亳州中药材市场（10#），经上海中医药大学李俊松高级实验师鉴定均为鸢尾科植物番红花（Crocus sativus L.）的干燥柱头。

2.1.1 供试品溶液的制备

取已干燥藏红花适量，置研钵中，研细，取10 mg，精密称定，置50mL棕色容量瓶中，加稀乙醇（取乙醇529 mL，加水至1 000 mL）适量，于冰浴中避光超声处理（58 kHz，300 W）20 min，放置至室温，加稀乙醇定容至刻度。摇匀，16 000 r/min 离心，取上清液，即得。

2.1.2 对照品溶液的制备

2.1.2.1 对照品贮备液的制备

精密称取西红花苷-Ⅰ对照品0.014 87 g、西红花苷-Ⅱ对照品0.010 34 g，分别置25mL棕色容量瓶中，加适量稀乙醇溶解，并稀释至刻度，制备成对照品贮备液（分别含西红花苷-Ⅰ541.9 μg/mL，含西红花苷-Ⅱ382.2 μg/mL）。

2.1.2.2 混合对照品溶液的制备

分别精密移取西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ对照品贮备液一定体积至同一容量瓶内，加稀乙醇，定容至刻度，依次配制成6 个不同浓度的混合对照品溶液。

2.1.3 色谱条件

色谱柱LunaC18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（45∶55，体积比）；检测波长：440 nm；流速：1.0 mL/min，柱温：30 ℃。

2.1.4 方法学考察

2.1.4.1 线性关系考察

精密移取6 个不同浓度的混合对照品溶液，按2.1.3 色谱条件进行测定，分别以对照品峰面积为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，得西红花苷的回归方程。西红花苷线性关系结果见表1，HPLC 色谱图见图1。

表1 西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的线性关系试验结果Table 1 Regression equations，correlation coefficients，and linearity ranges of crocinⅠ and crocin Ⅱ

组分回归方程r线性范围/（μg/mL）西红花苷-Ⅰ y=0.018 6x-0.74 1.000 0 5.419～108.373西红花苷-Ⅱ y=0.016 1x-0.65 0.999 9 3.822～76.433

图1 西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的HPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of crocin-Ⅰ and crocin-Ⅱ

2.1.4.2 加样回收试验

取2#供试品约15 mg，一式3 份，精密称定，置100mL容量瓶内，加适量稀乙醇溶解，分别精密加入西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ对照品贮备液1.5、3.5、5.0 mL，摇匀，按2.1.1 供试品溶液制备方法，制备样品溶液。按2.1.3 色谱条件测定，结果西红花苷-Ⅰ的平均回收率为99.81 %，相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）1.50%，西红花苷-Ⅱ的平均回收率为97.47%，RSD 0.95%。

2.1.4.3 精密度试验

1）对照品溶液

移取混合对照品溶液（西红花苷-Ⅰ浓度：27.093 μg/mL、西红花苷-Ⅱ浓度：11.465 μg/mL），一式3 份，按2.1.3 色谱条件测定，测得对照品西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ峰面积RSD 分别为0.57%、0.53%。

2）供试品溶液

取2#供试品，一式六份，精密称定，按2.1.1 法制备供试品溶液，按2.1.3 色谱条件测定，测得供试品中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ含量RSD 分别为0.81%、0.80%。

2.1.5 不同来源藏红花中西红花苷的含量测定

取10 批次国内外不同来源的藏红花，按2.1.1法制备供试品溶液，按2.1.3 色谱条件测定，结果见表2。

表2 国内外不同来源藏红花中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ含量测定结果Table 2 Quantitative determination results of crocin-Ⅰand crocin-Ⅱin saffron from different source at home and abroad

编号 来源 采集日期 西红花苷-Ⅰ/% 西红花苷-Ⅱ/% 西红花苷-Ⅰ+西红花苷-Ⅱ/%1# 崇明庙镇西红花基地 2014-11 16.73 6.18 22.91 2# 崇明建设镇西红花基地 2014-11 16.79 6.41 23.20 3# 浙江湖州 2014-11 16.29 6.24 22.53 4# 浙江建德 2014-11 15.58 6.02 21.60 5# 江苏南通 2014-11 15.15 5.72 20.87 6# 江苏东台 2014-11 13.63 5.83 19.46 7# 伊朗ESFEDANSAFFRON 2014-11 10.95 4.73 15.68 8# 伊朗BADIEESAFFRON 2014-11 11.32 3.74 15.06 9# 散装进口藏红花（四川荷花池中药材市场） 2014-11 10.40 3.53 13.93 10# 散装进口藏红花（安徽亳州中药材市场） 2014-11 9.33 3.23 12.56

2.2.1 供试品溶液的制备

取已干燥藏红花适量，置研钵中，研细，取50 mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加水90mL于冰浴中避光超声处理（58 kHz，300 W）20 min，放置至室温，加水定容至刻度，摇匀。精密移取10 mL，置100mL容量瓶中，加水至刻度。摇匀，16 000 r/min 离心，取上清液，即得。

2.2.2 测定

取供试品溶液于200 nm～700 nm 波长进行扫描，以水为空白，记录440、330、257 nm 处的吸光度。根据吸光度、称样量、干燥失重计算标示藏红花香味、芳香度和色度的3 个特征参数，按《中华人民共和国国家标准藏红花第一部分：规格》中化学指标标准判定供试品的等级分级，结果见表3，图2。

表3 国内外不同来源藏红花特征参数测定结果与对应等级Table 3 The determination results of characteristic parameters in saffron from different source at home and abroad

注：**表示因色度指标（440 nm）小于120，低于Ⅲ级标准，故为等外品。

编号 来源 采集日期 色度（440 nm） 芳香度（330 nm） 香味（257 nm） 等级1# 崇明庙镇西红花基地 2014-11 216 49 85 Ⅰ级2# 崇明建设镇西红花基地 2014-11 224 50 91 Ⅰ级3# 浙江湖州 2014-11 214 46 89 Ⅰ级4# 浙江建德 2014-11 212 41 86 Ⅰ级5# 江苏南通 2014-11 207 39 84 Ⅰ级6# 江苏东台 2014-11 186 36 82 Ⅱ级7# 伊朗ESFEDANSAFFRON 2014-11 149 49 85 Ⅲ级8# 伊朗BADIEESAFFRON 2014-11 140 38 77 Ⅲ级9# 散装进口藏红花（四川荷花池中药材市场） 2014-11 132 44 74 Ⅲ级10# 散装进口藏红花（安徽亳州中药材市场） 2014-11 118 32 51 **

图2 藏红花特征参数测定的紫外-可见分光光谱图Fig.2 UV/visible spectroscopic spectrum of characteristic parameters in saffron

1）藏红花具有独特的色、香、味，其特征参数强度与产品质量密切相关。在藏红花国际标准（ISO 3632-1：2011，ISO 3632-2：2010）中，采用紫外-可见分光光度法对标示藏红花色度、芳香度和香味的3 个特征参数指标进行测定，以评定产品质量等级。其中，色度以藏红花素（西红花苷）、芳香度以藏红花醛、香味以藏红花苦素为代表，最大吸收波长分别为440、330、257 nm。弥补了目前HPLC 法只测定西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ的局限性。本研究按该方法进行了测定，结果表明440 nm 的最大吸收值与HPLC 的测定结果呈正相关，与文献报道的一致[23]。

2）西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ作为藏红花的质控指标，在《中国药典》一部中规定两者含量之和不得少于10.0%（按照干燥品计算）。本研究对西红花苷-Ⅰ、西红花苷-ⅡHPLC 含量测定方法进行了方法学考察，实验表明结果准确、可靠。国内外不同来源的西红花虽然含量差异较大（12.56%～23.20%），但是均符合中国药典标准。同时，按照藏红花国际标准（ISO 3632-1：2011）测定了藏红花的3 个特征参数，以色、香、味指标成分进行产品分级，国产西红花的质量明显优于进口西红花，散装进口花的质量参差不齐。

3）本文研究结果表明，国产藏红花中活性成分西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的含量明显高于进口藏红花。这主要源于国内外藏红花的不同栽培模式。在中东地区，藏红花普遍采用“露地栽培”模式，即藏红花自种球种植于地下至开花采收整个过程，皆在大田中进行，连续耕作。由于气候条件的差异，我国则采用了“露地种植球茎，室内培育鲜花”的栽培模式，并通过人工干预控制单个种球芽的数量，防止了球茎的退化，实现了生产大球茎的目标。大球茎开出的花数量多、质量好，造就了国产藏红花优异的品质——国产藏红花花蕊粗大、颜色深红、活性成分含量高，而进口花花蕊细短，颜色较浅、活性成分含量低，两者品质差异显著。

4）为了准确评价不同产地藏红花的质量，试验中的国产藏红花是直接从产地藏红花基地或种植农户处购买，伊朗进口西红花通过其品牌代理商购买，散装藏红花在四川荷花池和安徽亳州中药材市场采购。所有藏红花供试品均为2014年产新的全红精制花，经鉴定均为正品。

5）藏红花不仅是香料和色素，还具有广泛的药理活性，国内外对其研究方兴未艾。作为一种高附加值的经济作物，目前已在上海、浙江、江苏、安徽等地引种成功，其中上海崇明为国内西红花的主产区之一，出产的藏红花质量优异，不仅西红花苷含量高，而且其色度、芳香度和香味均达到国际西红花等级分类高等级标准。本研究通过国内外不同来源藏红花有效成分含量的比较，为该产品扩大市场应用提供了数据支持。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].北京:中国医药科技出版社，2015:129

[2]谭安雄，朱耀斌，王玉银.西红花酸对大鼠脑缺血-再灌注氧自由基及一氧化氮的影响[J].医药导报，2011，30(7):846-848

[3]Lahmass I，Ouahhoud S，Elmansuri M，et al.Determination of Antioxidant Properties of Six By-Products of Crocus sativus L.(Saffron)Plant Products[J].WASTE AND BIOMASS VALORIZATION，2017，9(8):1349-1357

[4]徐沁蕾，钱之玉.西红花酸抗凝血和抗血栓形成作用的实验研究[J].中草药，2007，38(1):89-91

[5]蔡恒玲，刘应辉，刘娜娜.西红花酸对动脉粥样硬化大鼠血脂及LOX-1 表达的影响[J].中国现代医药杂志，2011，13(10):3-5

[6]Tong L J，Qi G X.Crocin prevents platelet-derived growth factor BB-induced vascular smooth muscle cells proliferation and phenotypic switch[J].MOLECULAR MEDICINE REPORTS，2018，17(6):7595-7602

[7]Algandaby M M.Antifibrotic effects of crocin on thioacetamide-induced liver fibrosis in mice[J].SAUDI JOURNAL OF BIOLOGICAL SCIENCES，2018，25(4):747-754

[8]Finley J W，Gao S.A Perspective on Crocus sativus L.(Saffron)Constituent Crocin:A Potent Water-Soluble Antioxidant and Potential Therapy for Alzheimer's Disease[J].JAgricFood Chem，2017，65(5):1005-1020

[9]Delkhosh-Kasmaie F，Farshid A A，Tamaddonfard E，et al.The effects of safranal，a constitute of saffron，and metformin on spatial learning and memory impairments in type-1 diabetic rats: behavioral and hippocampal histopathological and biochemical evaluations[J].Biomedicine & pharmacotherapy，2018，107:203-211

[10]Baghishani F，Mohammadipour A，Hosseinzadeh H，et al，The effects of tramadol administration on hippocampal cell apoptosis，learning and memory in adult rats and neuroprotective effects of crocin[J].METABOLIC BRAIN DISEASE，2018，33(3):907-916

[11]Pitsikas N，Tarantilis P A.Effects of the active constituents of Crocus sativus L.crocins and their combination with memantine on recognition memory in rats[J].BEHAVIOURAL PHARMACOLOGY，2018，29(5):400-412

[12]Malaekeh-Nikouei B，Mousavi S H，Shahsavand S，et al.Assessment of cytotoxic properties of safranal and nanoliposomal safranal in various cancer cell lines[J].Phytotherapy Research，2013，27(12):1868-1873

[13]Hoshyar R，Bathaie S Z，Sadeghizadeh M.Crocin triggers the apoptosis through increasing the Bax/Bcl-2 ratio and caspase activation inhumangastricadenocarcinoma，AGS，cells[J].DNA Cell Biol，2013，32(2):50-57

[14]Kalalinia F，Ghasim H，Farzad S A，et al.Comparison of the effect of crocin and crocetin，two major compounds extracted from saffron，on osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells[J].Life sciences，2018，208:262-267

[15]Yaribeygi H，Mohammadi M T，Rezaee R，et al.Crocin improves renal function by declining Nox-4，IL-18，and p53 expression levels in an experimental model of diabetic nephropathy[J].JOURNAL of CELLULAR BIOCHEMISTRY，2018，119(7):6080-6093

[16]Sepahi S，Mohajeri S A，Hosseini S M，et al.Effects of Crocin on Diabetic Maculopathy:A Placebo-Controlled Randomized Clinical Trial[J].AMERICAN JOURNAL of OPHTHALMOLOGY，2018，190:89-98

[17]Doumouchtsis E K，Tzani A，Doulamis I P，et al.Effect of Saffron on Metabolic Profile and Retina in Apolipoprotein E-Knockout Mice Fed a High-Fat Diet[J].Journal of dietary supplements，2017，15(4):471-481

[18]Sarris Jerome.Herbal medicines in the treatment of psychiatric disorders:10-year updated review[J].PHYTOTHERAPY RESEARCH，2018，32(7):1147-1162

[19]Mingwu Deng，Dong Li，Yichen Zhang，et al.Protective effect of crocin on ultraviolet B-induced dermal fibroblast photoaging[J].MOLECULAR MEDICINE REPORTS，2018，18(2):1439-1446

[20]王平，童应鹏，陶露霞，等.西红花的化学成分和药理活性研究进展[J].中草药，2014，45(20):3105-3028

[21]Lage M，Cantrell C L.Quantification of saffron (Crocus sativus L.)metabolites crocins，picrocrocin and safranal for quality determination of the spice grown under different environmental Moroccan conditions[J].SCIENTIA HORTICULTURAE，2009，121(3):366-373

[22]Rocchi R，Mascini M，Sergi M，et al.Crocins pattern in saffron detected by UHPLC-MS/MS as marker of quality，process and traceability[J].FOOD CHEMISTRY，2018，264:241-249

[23]周桂芬，留永咏，钱晓东，等.基于中国药典与国际标准对西红花生产流通中质量评价方法的改良[J].药物分析杂志，2016，36(5):835-841

Quality Evaluation of Saffron from Different Sources at Home and Abroad

LIN Dong-hao1，MAO Ren-fei2（1.Life Science College，Shanghai Normal University，Shanghai 200234，China；2.Shanghai Yingzhou Saffron Planting Professional Cooperative，Shanghai 202155，China）

Abstract：In order to evaluate the quality of saffron from different sources at home and abroad，a high performance liquid chromatography（HPLC）method was established to determine the content of crocinⅠ and crocinⅡ，meanwhile，a UV/visible spectrophotometry was established to determine the three characteristic parameters of odor，flavor and color in saffron.HPLC method was carried out with column C18，using methanol and water（45∶55，volume ratio）as the mobile phase at flow rate of 1 mL/min.The detection wavelength was at 440 nm and the column temperature was at 30 ℃.The calibration curve of crocinⅠ was in good linearity at 5.419 μg/mL-108.373 μg/mL （r=1.000 0）and the average recovery was 99.81 % with relative standard deviation（RSD）of 1.50%.The calibration curve of crocinⅡ was in good linearity at 3.822 μg/mL-76.433 μg/mL（r=0.999 9）and the average recovery was 97.47 % with RSD of 0.95 %.The HPLC method was accurate and stable.There was a significant difference in the content of crocinⅠ and crocinⅡ.UV/visible spectrophotometry was carried out at 257，330 nm and 440 nm.The absorbance values of three characteristic parameters in saffron were different.The saffron samples belonged to the different grade.

Key words：high performance liquid chromatography（HPLC）；UV/visible spectrophotometry；saffron；different sources；crocinⅠ；crocinⅡ；characteristic parameters

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2019.13.029

基金项目：上海市科技兴农推广项目（沪农科推字（2018）第2-2 号）；上海市崇明区科学技术发展资金项目（CKZL2017-05）

作者简介：林东昊（1970—），女（汉），高级工程师，硕士，研究方向：质量标准研究。

引文格式：

林东昊，茅人飞.国内外不同来源藏红花的品质评价[J].食品研究与开发，2019，40（13）：178-182

LIN Donghao，MAO Renfei.Quality Evaluation of Saffron from Different Sources at Home and Abroad[J].Food Research and Development，2019，40（13）：178-182

收稿日期：2019-01-17