细菌抗药性产生有几种原理

1 分解抗生素,如抗贝塔内酰胺类的抗生素基因,是产生一种能够分解抗生素的酶

2 将抗生素运出细胞,比如LMRA基因可以产生一种将林可霉素运出细胞外的酶

3 阻断与抗生素的作用位点,如将某个位点进京修饰使得抗生素难以识别等

按照你的表述,EcoRI酶切位点是在卡那霉素抗性基因内部?

那么,如果这个抗性基因插入了你的目的基因,那么这个基因就被破坏,也就失去了卡那抗性.

所以,插入了目的基因的质粒,应该是只有氨苄抗性的.所以转化之后涂平板,不能用双抗,只能用氨苄抗性.

要鉴别是否插入目的基因,很简单：

1,菌落pcr：从转化平板上随机挑选几个菌落,用普通pcr体系,以菌体为模板,做pcr,然后跑胶鉴定.(我的经验,这一步阳性了就基本准了)

2,从菌落pcr阳性菌内提质粒酶切鉴定.（这个最准）

3,如果你实在是要求用抗性来筛（其实抗性筛选不是很准）,你用两种平板,一种是amp平板（也就是转化用的平板）,一种是amp+kan平板,你用接种环或者灭过菌的牙签,从amp转化平板上的菌落点一下,再在amp

+kan平板上原位点一下,培养.

如果同一个菌落,只能在amp上长,而不能在双抗上长,就可能是重组质粒.

选择性标记基因(抗生素抗性基因可以对质粒载体经行标记以便选择)

不是

青霉素通过抑制细菌细胞壁四肽则链和五肽交连桥的结合而阻碍细胞壁合成而发挥杀菌作用.对革兰阳性菌有效,由于革兰阴性菌缺乏五肽交连桥而青霉素对其作用不大.

破坏不敢说,准确的说法是抑制.原理如上.咱学时候就是这样.

细胞壁是比较有韧性的,可以当作细胞的支持,就好象一个气球,可以装一定量的空气,但再多的空气进去可以撑破它.

青霉素通过抑制细菌细胞壁四肽则链和五肽交连桥的结合而阻碍细胞壁合成而发挥杀菌作用.对革兰阳性菌有效,由于革兰阴性菌缺乏五肽交连桥而青霉素对其作用不大.

破坏不敢说,准确的说法是抑制.原理如上.咱学时候就是这样.

细胞壁是比较有韧性的,可以当作细胞的支持,就好象一个气球,可以装一定量的空气,但再多的空气进去可以撑破它.