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作者：

陈舒妤

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摘要：

五味子是木兰科植物五味子的干燥成熟果实。五味子为中国、韩国和俄罗斯的民间常用药材,用于治疗遗精、大汗淋漓、腹泻、失眠、疲劳、神经衰弱等病症,具有镇静滋补作用。现有研究表明,木脂素类化合物,特别是联苯环辛二烯型木脂素,和有机酸类化合物是五味子中较为主要的生物活性化合物。木脂素具有丰富的生物活性,包括降酶保肝、抗氧化、抗肿瘤、保护中枢神经系统和抗癌等效应。有机酸具有止咳化痰的药理作用。目前,五味子质量控制的定量分析报道大多集中在某一类特定的化合物或某些活性成分上,而同时测定五味子中木脂素和有机酸的报道尚少。除了生态环境的影响,五味子药材的品质还受采收时间、加工方法、贮藏条件等因素的影响,导致市面上五味子质量参差不齐。因此,如何保证五味子药材的优质、稳定已经成为了其生产过程中亟待解决的问题。本课题依托国家中药标准化项目"生脉注射液标准化建设(ZYBZH-C-JS-32)",开展了五味子药材品质形成与质量评价及生脉注射液原料药材五味子质量标准提升研究。采用超快速液相-串联三重四级杆线性离子阱质谱(UFLC-QTRAP-MS/MS)分析比较了商品药材,不同生态型,不同采收期,不同加工方法,不同贮藏条件五味子药材中11种木脂素和4种有机酸共15种指标性成分的含量,探究五味子药材的品质形成。采用薄层色谱法(TLC)、超高效液相色谱法(UPLC)对生脉注射液原料药材五味子的种植基地药材进行鉴别、特征图谱、含量测定研究,制定生脉注射液原料药材五味子的质量标准及其药材采收、加工、贮藏标准。课题研究内容主要分为以下几个部分:1、文献研究系统查阅国内外相关文献,并对其进行文献综述研究。2、五味子商品药材的质量分析优化、建立了UFLC-QTRAP-MS/MS同时测定五味子中木脂素(戈米辛D、五味子醇乙、五味子丙素、当归酰基戈米辛H、五味子酯甲、五味子酚、五味子酯乙、戈米辛J、五味子甲素、五味子醇甲、五味子乙素)及有机酸(原儿茶酸、L-苹果酸、奎宁酸、酒石酸)共15种目标成分含量的方法,结合灰色关联度分析(GRA)和逼近理想解排序法(TOPSIS)对五味子商品药材进行分析与评价。本实验所建立的方法可靠、准确。可为五味子中多元指标成分的同时测定以及全面控制五味子药材内在质量和综合评价提供新的方法参考。3、不同生态型五味子指标性成分的比较分析用UFLC-QTRAP-MS/MS技术对12批不同生态型五味子样品(6批野生与6批栽培)中15种成分的含量进行了同时测定。结合主成分分析(PCA),偏最小二乘判别分析(PLS-DA),t检验和GRA法,对不同生态型五味子进行差异分析和综合评价。结果表明,野生和栽培五味子中4种目标成分(奎宁酸、L-苹果酸、原儿茶酸、五味子醇乙)差异显著;野生五味子的品质优于栽培品。本研究为揭示生态型对五味子药材品质的影响提供基础资料。4、五味子指标性成分的累积动态及其变化规律 用UFLC-QTRAP-MS/MS同时测定不同采收时间五味子药材中15种目标成分含量,考察其动态积累的变化规律。采用GRA对不同采收期五味子药材进行比较分析与综合评价。结果表明:五味子药材以八月中旬至九月中旬采收的样品综合质量较优。本研究为五味子药材适宜采收期的优选提供基础资料。5、不同加工方法对五味子药材指标性成分的影响 用UFLC-QTRAP-MS/MS同时测定不同加工方法五味子样品中15种目标成分的含量,结合聚类分析(HCA)及GRA对不同加工五味子样品的质量进行综合评价。结果表明:蒸后热风干燥样品的综合质量不如直接热风干燥的样品好,40 ℃热风恒温干燥至水分含量35%后晒干样品的综合质量较优。本研究为五味子产地初加工方法的优选及其规范化和标准化提供基础资料。6、不同贮藏方法对五味子药材指标性成分的影响用UFLC-QTRAP-MS/MS同时测定不同贮藏条件(不同包装材料,不同贮藏温度)五味子药材中木脂素及有机酸共15种目标成分的含量,结合GRA和TOPSIS法对不同贮藏五味子进行综合评价。综合评价结果显示,以聚乙烯密封袋、陶瓷缸和麻袋为包装材料贮藏于阴凉库的样品综合质量均较好。本研究可为五味子适宜储藏条件的优选提供基础资料。7、生脉注射液原料药材五味子标准化研究根据生脉注射液功效特点和五味子所含活性成分,结合五味子药材品质形成探究,在2015版《中国药典》五味子质量标准的基础上,提升生脉注射液原料药材五味子的质量标准。优化建立以五味子对照药材和五味子甲素、五味子醇甲、五味子醇乙对照品为对照的薄层色谱;优化建立标定并指认其中8个木脂素类成分的13个共有峰的UPLC特征图谱;优化建立五味子醇甲、五味子醇乙的含量测定方法,并制订含量限度。结合产地采收、加工、贮藏的实际情况,以五味子醇甲、五味子醇乙为指标,考察采收时间及优化加工方法、贮藏条件,制定生脉注射液原料药材五味子的采收、加工、贮藏的企业标准。

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关键词：

五味子 木脂素 有机酸 同时测定 标准化 品质评价