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作者：

刘杨

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摘要：

背景: 乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)定量检测在指导慢性乙型肝炎病人的临床治疗中具有重要的应用价值.目前由于临床慢性乙肝病人标本HBsAg浓度较高,现有商品化试剂如罗氏,雅培等均需要稀释才能检测HBsAg定量水平,检测效率较低.因此,本研究拟研制一种无需稀释便可以检测出大部分临床标本的HBsAg中高值定量试剂盒(化学发光微粒子免疫检测法),提高临床实验室对 HBsAg定量的检测效率. 方法: 通过抗体间两两交叉配对的方式,筛选出合适的HBsAg抗体包被磁微粒作为磁微粒试剂(M),标记吖啶酯作为吖啶酯试剂(R2),与反应稀释液(R1)共同组成化学发光微粒子免疫分析法HBsAg中高值定量试剂盒.用所研制的试剂检测一系列阴性和阳性样本,并以阳性样本和阴性样本检测信号的比值(P/N),试剂检测范围,标准曲线线性拟合相关系数r值等作为反应活性的判断依据,选择最佳的试剂制备工艺和反应体系,并对试剂的线性范围,检测限,精密度,交叉反应等性能做评价.通过进一步检测具有罗氏背景的临床样本,研究该试剂的临床性能,评估该试剂对不同感染阶段和不同基因型样本的检测结果与罗氏检测结果的相关性,一致性等. 结果: 通过筛选最终选用Ab-3,Ab-4,Ab-6和Ab-8包被磁微粒,最佳包被工艺为:每mg磁微粒包被40ug抗体,包被缓冲液为0.02mol/L pH6.5 PBS,包被温度为25℃,包被时间3h,终止时间3h;通过筛选最终选用Ab-1标记吖啶酯,最佳标记工艺为:每100ug原料标记12ul的0.005 mol/L吖啶酯母液,标记缓冲液为0.02mol/L pH8.0PBS,标记温度为25℃,标记时间30min,终止时间30min;最佳反应体系为:反应稀释液用量100ul,样本加样量20ul,磁微粒试剂和吖啶酯试剂用量均为50ul,磁微粒的使用浓度分别为0.4mg/ml,吖啶酯稀释比例为1/200;试剂性能评估结果显示,优化后试剂检测范围为20IU/ml～100000IU/ml,最低检测限不高于20IU/ml,试剂检测精密度小于10.0%,试剂检测不受常规浓度的胆红素,血脂,溶血,RF及抗凝剂的影响,且与其他病毒阳性样本无交叉反应;临床试验结果表明,该试剂与罗氏试剂检测结果相关性好r=0.978,回归方程为y=1.001x-0.018(y为考核试剂,x为对比试剂),对不同感染阶段,不同基因型及不同浓度水平的HBsAg阳性样本相关性一致性均好,两试剂检测结果的符合率为100%,Kappa值为1. 讨论: 新型乙肝病毒表面抗原(HBsAg)中高值定量测定试剂盒(化学发光微粒子免疫检测法)与罗氏试剂检测结果相关性好,且其不对样本进行稀释条件下的检测范围远高于罗氏试剂,大大提高了仪器的检测通量,节约了检测成本,提高了实验室的工作效率,故对临床实验室有着重要的应用价值.

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关键词：

乙型肝炎病毒表面抗原 化学发光微粒子免疫分析 临床性能 检测效率

学位级别：

硕士

学位年度：

2016