时间分辨荧光免疫分析技术 (TRFIA) 在乙肝病毒血清学标志物检测中的应用

【摘要】 目的 调查时间分辨荧光免疫分析技术 (TRFIA) 在乙型肝炎血清学标志物检测中的应用情况。方法 采用 AT-2000 时间分辨荧光免疫分析仪及配套试剂对 180 例正常人血清及 46 例乙型肝炎患者血清用 TRFIA 检测 HbsAg 、 HbsAb 、 HbeAg 、 HbeAb 及 HbcAb ，同时用 AXSYM 免疫分析仪微粒子酶免分析法（ MEIA ）进行检测。结果 46 份患者血清 TRFIA 法检测结果同 MEIA 法比较，阳性符合率 HBsAg 100% ， HBsAb 93.02% ， HBeAg 97.75% ， HBeAb 90.25% ， HBcAb 91.67% 。灵敏度为 HBsAg 100% ， HBsAb 100% ， HBeAg 100% ， HBeAb 100% ， HBcAb 96% 。特异性为 HBsAg100% ， HBsAb 91% ， HBeAg 100% ， HBeAb 88% ， HBcAb 90% 。结论 时间分辨荧光免疫分析技术检测乙型肝炎血清学五项标志物，灵敏度高、稳定性好、经济、符合国情，可作为乙型肝炎病毒定量的一种常规方法。

【关键词】 时间分辨荧光免疫分析；乙型肝炎病毒

【 Abstract 】 Objective To research the application of the analysis technique of the time resolved fluoroimmuno assay in serum testing for the hepatitis B virus. Methods By AT-2000 time resolved fluoroimmuno assay instrument and reagents to examine 180 serum samples of normal people and 46 serum samples of patients for HBsAg, HBsAb, HBeAg, HbeAb and HbcAb and then compare the results with AXSYM MEIA's. Results For the results of 46 serum samples of patients, the positive compatibility rate of TRFIA method with MEIA method for HbsAg, HbsAb, HbeAg, HbeAb and HBcAb is 100%, 93.02%, 97.75%, 90.25% and 91.67%, respectively. Sensitivity is 100%, 100%, 100%, 100% and 96%, and specificity 100%, 91%, 100%, 88% and 90%. Conclusion The method of examining serological markers of hepatitis B virus by time resolved fluoroimmuno assay with high sensitivity and good stability is cost-effective and suitable for China 's conditions, and can be used as a routine method of quantitative assay for hepatitis B virus.

【 Key words 】 Time resolved fluoroimmuno assay; hepatitis B virus

　　乙肝病毒 (Hepatits B veius HBV) 感染是我国最常见的感染性疾病之一，而应用免疫技术测定 HBV 特异性抗原抗体是 HBV 感染诊断的主要手段。由于免疫学技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平 HBV 感染得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义 [1] 。另外，由于可进行定量分析，这对药物疗效观察和病情监测具有重要意义 [2] 。时间分辨荧光免疫分析技术 (time resolved fluorecence immunanssay TRFIA) 是一个灵敏度高、特异性强的新的免疫检测技术，本文应用这一技术对来我院就诊的 HBV 感染者及正常人进行了检测，并与 Axsym 微粒子酶免分析法 (MEIA) 进行了方法学比较，其结果如下：

一、材料与方法 1、标本来源 : （ 1 ） 正常人血清：取自我院体检正常人群 180 份。 （ 2 ） 乙型肝炎患者血清：取自我院住院及门诊患者 46 份。 （ 3 ） 质控血清： ①卫生部临检中心质控血清（批号为 0207 ）浓度分别为： 0.2ng,0.5ng,1.0ng,5.0ng ②北京市临检中心质控血清（批号为 0209 ）浓度分别为： 2.0ng,5.0ng

2、方法和试剂 : （ 1 ） 参照方法：微粒子酶免分析法 (MEIA) 采用 Axsym 全自动免疫分析仪及配套试剂，为美国 Abbott 公司产品，试剂批号为 HBsAg 91046LU00. HBsAb 89348LU01. HBeAg 88314HP00. HBeAb 84053HP00. HBcAb 88058LU00. （ 2 ）测试方法：时间分辨免疫荧光分析法 (TRFIA) 采用 AT-2000 时间分辨荧光免疫分析仪及配套试剂，为上海新波生物技术有限公司产品。试剂批号乙肝两对半均为 20020726.

二、结果与分析： 1、HBsAg    TRFIA cut off 值 HBsAg 浓度≥ 0.5ng/ml 为阳性，    MEIA cut off 值 HBsAg 浓度 S/N>2.0 为阳性，其二法定性结果见表１

表 1 TR-FIA 和 MEIA 检测定性结果四格表

灵敏度 46/(0+46)*100%=100% 特异性 46/(46+0)*100%=100% 诊断符合率 100%

　　使用 TRFIA 方法对本地区 180 例正常人进行 HbsAg 测定，结果呈正态分布 : 均值 0.12. 标准差 0.062 。该调查结果符合中国药品生物制品检验所规定最低检出量 0.5ng/ml 。并与 Abbott 公司配套肝炎诊断方法（ MEIA ）比较，相关系数为 0.833, 具有较好相关，该法检测灵敏度为 0.36ng/ml 。卫生部临检中心 1ng/ml 质控血清对照 : 均值 1ng/ml. 标准差 0.15. 变异系数 15% 。

　　ELISA 方法及金标法检测灵敏度分别为 0.5ng/ml 和 5ng/ml 。提示该法与 MEIA 的灵敏度相似，能检测到低浓度之 HBsAg, 初步解决了隐源性肝炎中 HBV 标志检测的问题。 [1]

2、HBsAb    TRFIA cut off 值的 HBsAb 浓度≥ 10mIU/ml 时为阳性，    MEIA cut off 值的 HBsAb 浓度 >10mIU/ml 时为阳性，其二法定性结果见表 2

表 2 TRFIA 和 MEIA 检测抗 HBs 定性结果四格表

灵敏度 22/(22+0)*100%=100% 特异性 64/(6+64)*100%=91% 诊断符合率 91%

3、HBeAg ：    TRFIA cut off 值 HBeAg 的浓度 >0.03NCU/ml 为阳性 ,    MEIA cut off 值 HBeAg 的浓度 S/CO>1.0 为阳性 , 其二法定 性结果见表 3

表 3 TRFIA 和 MEIA 检测 HBeAg 定性结果四格表

灵敏度 30/(30+0)*100%=100% 特异性 58/(0+58)*100%=100% 诊断符合率 97.7%

4、HBeAb ：    TRFIA cut off 值 HBeAb>1.5NCU/ml 为阳性，    MEIA cut off 值 HBe Ab S/N0.1NCU/ml 为阳性 ,    MEIA cutoff 值 HBcAb S/N