Optimization of a Quantitative Micro

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2024-06-15 22:16| 来源: 网络整理| 查看: 265

经上述程序,我们提出最近的抗原特性的实验的一些结果。滴定设置旨在探讨八个输入病毒,与每个稀释度双重复。病毒稀释液进行试验1.0和1.0之间×10 -1×1.0 -6覆盖病毒之间的变化。测试病毒是由H3N2亚型,包括A /喀麦隆/ 15V-二千〇一十五分之三千五百三十八,A /符拉迪沃斯托克/ 36/2015年,A /莫斯科/ 103/2015年,A /托木斯克/ 5/2015 /,A /莫斯科/ 101 / 2015,A /莫斯科/ 100/2015,A /莫斯科/ 133/2015和A /布拉迪斯拉发/ 437/2015。滴定结果示于图5中示出。 图5d说明了的ICP的病毒稀释度的增加而减少。曲线进行归针对的一个井12内产生的所有小区感染同一病毒的ICP(定义为ICP饱和度)。如果ICP并没有随着喜达到饱和ghest病毒浓度,从相应的重复平均ICP代替(A /莫斯科/ 103/2015 图5d)。所产生ICP饱和的30%的病毒稀释液被选择作为输入的病毒稀释度中和( 表3)。

中和的目的是有一个输入病毒对五种抗血清,对每个板双重复。所示的基准病毒是H3N2 A /斯德哥尔摩/ 63/2015五个抗血清A / HK14分之4801蛋F12 / 15,A / HK十四分之七千二百九十五MDCK F02 / 15,A /南非R2665 / 15 SIAT F50 / 15,A /瑞士十三分之九百七十一万五千九百二十三SIAT NIBF F18 / 15,和A /荷兰十四分之五百二十五SIAT F23 / 15。中和的结果在图6中示出。 图6d示出了具有血清稀释度的增加的感染的进展。在垂直轴上的归一化阳性群体代表的ICP的从对平均ICP相应的抗血清反应的比率的基准病毒12。未感染细胞对照背景ICP正常化过程中扣除。中和滴度被确定为对应于50%的ICP降低( 表4)的抗血清稀释液的倒数。线性内插来估计滴度两个相邻的血清稀释度之间落下。

图1: 在病毒滴定实验一孔板设置举例。测试病毒被分配到不同的行(A至H)。列是针对不同的病毒稀释液(1到12)。两列被用作复制每个病毒稀释。比例尺= 10毫米。 请点击此处查看该图的放大版本。

图2: 样品扫描系统的原理图。 (a)在平板扫描仪的成像位置A 96孔板(从再版 附图11用从爱思唯尔BV许可),和(b)中所示的L形位置极限尺寸(一)。 请点击此处查看该图的放大版本。

图3:“多孔板阅读器”定量软件的台式图。 请点击此处查看该图的放大版本。

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图4: 在中和实验中孔板设置举例。各抗血清被分配给两列重复(1〜10)。行针对不同的血清稀释(A至H)。该病毒控制需要11列,有八个重复(A11至H11)。小区控制是在第12栏,有八个重复(A12至H12)。比例尺= 10毫米。 请点击此处查看该图的放大版本。

图5:滴定实验的结果。 ( 一 )该井板设置,( 二 )扫描孔板图像,(C)说明的颜色编码的,定量,病毒感染的细胞群,和针对病毒稀释液(D)的归一化的病毒感染的细胞群。 30%的ICP用作阈值。 (d)中的误差棒是从样品重复(±1 SD)标准差(SD)。的(b)和(c)比例尺= 10毫米。 请点击此处查看该图的放大版本。

图6: 中和试验的结果。 ( 一 )该井板设置,( 二 )扫描孔板图像,(c)该定量,病毒感染的细胞群的画像,和对血清稀释度(D)的归一化的病毒感染的细胞群。输入VIRUS(VC)是A /斯德哥尔摩/ 63/2015 50%的ICP来计算滴度。 (d)中的误差棒是从样品重复(±1 SD)标准差(SD)。的(b)和(c)比例尺= 10毫米。 请点击此处查看该图的放大版本。

补充S1: 请点击这里下载该文件。

典型的稀释 MDCK细胞 MDCK-SIAT1细胞 2天 1:5(1 + 4) 1:10(1 + 9) 3天 > 1:10(1 + 9) 1:20(1 + 19) 每ml细胞的典型数 MDCK细胞 MDCK-SIAT1细胞 2天 2×10 5个 1×10 5个 3天 1×10 5个 5×10 4

表1:MDCK或MDCK-SIAT1细胞融合瓶的亚文化的典型稀释。

模式专业模式文件类型膜(该片区指南) 自动曝光类型照片 IM年龄类型 24位彩色解析度 1200 DPI 保存的图像格式 TIFF

表2:平板扫描仪的典型设置。

行 病毒 建议稀释 一个 A /卡梅伦/ 15V-二千〇一十六分之三千五百三十八 1.0×10 -2 乙 A /符拉迪沃斯托克/2015分之36 1.0×10 -3 C A /莫斯科/二千〇一十五分之一百〇三 1.1×10 -1 ð A /托木斯克/二千〇一十五分之五 5.9×10 -1 Ë A /莫斯科/二千〇一十五分之一百〇一 8.3×10 -1 F A /莫斯科/二千零十五​​分之百 1.4×10 -2 G A /莫斯科/二千〇一十五分之一百三十三 1.3×10 -2 H A /布拉迪斯拉发/二千〇一十五分之四百三十七 1.3×10 -4

表3:从30%ICP的人口计算的病毒稀释液。

柱 抗血清 推荐滴度 1 - 2 A / HK4801 / 2014 110 3 - 4 A / HK7295 / 2014 213.3 A /南非/ R2665 / 2015 2155.8 7 - 8 A /瑞士/二千〇一十三分之九百七十一万五千二百九十三 89.4 9 - 10 A /荷兰/二千〇一十四分之五百二十五 78.6

表4:A /斯德哥尔摩的50%ICP /二千零十五分之六十三反对抗血清滴度。



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