蛋白电泳缓冲液和试剂

2023-08-22 07:36| 来源: 网络整理| 查看: 265

SDS 样品缓冲液或上样缓冲液

用于 SDS-PAGE 分析的蛋白样本，可通过在上样缓冲液中加热进行变性，上样缓冲液通常含有 1-2% SDS 或 LDS，加入或没加还原剂，如 20mM DTT、2-巯基乙醇 (BME) 或 TCEP。样品缓冲液或上样缓冲液也含有甘油，因此它们比水重，在加入凝胶后能完全沉入浸有缓冲液的上样孔底部。此外，上样缓冲液中还含有带负电荷的低分子量染料，它会在缓冲液前沿迁移，从而可以监控电泳进程。上样缓冲液中最常见的示踪染料是溴酚蓝、酚红和考马斯蓝。下表总结了不同凝胶缓冲液系统中常用的上样缓冲液。

凝胶系统变性上样缓冲液（终浓度）电泳样品制备Tris-甘氨酸Tris-甘氨酸 SDS 上样缓冲液：Tris HCl (63 mM)、甘油 (10%)、SDS (2%)、溴酚蓝 (0.0025%)、pH 6.8加入上样缓冲液，在 85℃ 下加热样本 2-5 分钟Bis-Tris 体系LDS 上样缓冲液：Tris base (141 mM)、Tris Hcl (106 mM)、LDS (2%)、EDTA (0.51 mM)、SERVA Blue G-250 (0.22 mM)、酚红 (0.175 mM)、pH 8.5加入上样缓冲液，在 70℃ 下加热样本 10 分钟Tris-乙酸体系LDS 上样缓冲液：Tris base (141 mM)、Tris Hcl (106 mM)、LDS (2%)、EDTA (0.51 mM)、SERVA Blue G-250 (0.22 mM)、酚红 (0.175 mM)、pH 8.5加入上样缓冲液，在 70℃ 下加热样本 10 分钟Tris-TricineTricine SDS 上样缓冲液：Tris Hcl (450 mM)、甘油 (12%)、SDS (4%)、考马斯蓝 G (0.00075%)、酚红 (0.0025%)、pH 8.45加入上样缓冲液，在 85℃ 下加热样本 2-5 分钟酶谱分析（Zymogram）Tris-甘氨酸 SDS：Tris HCl (63 mM)、甘油 (10%)、SDS (2%)、溴酚蓝 (0.0025%)、pH 6.8不要加热样本，加入样本后立即凝胶上样

对于各种荧光应用，我们建议使用不含干扰荧光通道的染料的上样缓冲液（例如，溴酚蓝）。荧光兼容上样缓冲液不含溴酚蓝或其他干扰染料，适用于还原性或非还原性 SDS-PAGE 应用。

如需 SDS 上样缓冲液的配方，可在技术资源标签页中的凝胶产品手册里获取。非变性上样缓冲液

用于非变性 PAGE 应用的蛋白样本，应使用不含去垢剂的上样缓冲液制备，以维持蛋白质的天然状态。上样缓冲液含有甘油，因此它们比水重，在加入凝胶后能完全沉入浸有缓冲液的上样孔底部此外，上样缓冲液中还含有带负电荷的低分子量染料，它会在缓冲液前沿迁移，从而可以监控电泳进程。

当制备用于非变性分析应用的样本时，蛋白样本不应进行加热，并应在与样品缓冲液混合后立即加载到凝胶上。

凝胶系统非变性上样缓冲液（最终浓度）Tris-甘氨酸非变性上样缓冲液：Tris HCl (100mM)、甘油 (10%)、溴酚蓝 (0.00025%)、pH 8.6Tris-乙酸非变性上样缓冲液：Tris HCl (100mM)、甘油 (10%)、溴酚蓝 (0.00025%)、pH 8.6等电聚焦（IEF）IEF 上样缓冲液 pH 3-7：赖氨酸 (40mM)、甘油 (15%)IEF 上样缓冲液 pH 3-10：精氨酸 (20mM)、赖氨酸 (20mM)、甘油 (15%)NativePAGE Bis-TrisNativePAGE 上样缓冲液 (4X)：Bis-Tris (50mM)、6 N HCl、NaCl (50mM)、甘油 (10%)、胭脂红 S (0.001%)、pH 7.2如需非变性上样缓冲液的配方，可在技术资源标签页中的凝胶产品手册里获取。

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