科普茵实验室：菌种的分离方法三划线分离法

在防霉抗菌研究中，常常需要把引起霉腐）变的微生物进行分离培养，从混杂的微生物群体中把不同种的微生物分离开，以获得纯种（纯化）。获得纯种的方法很多，但基本原理却是相似的，即将分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（孢子）尽量以分散状态存在，然后长成一个个单菌落。如将单菌落移接到适当的培养基上，一般就算获得了纯种微生物。

菌种的分离方法三划线分离法：

平板划线分离法，是用接种环在平板培养基表面通过分区划线而达到分离微生物的一种方法。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次做“由点到线”的稀释而达到分离的目的。方法如下:

步骤一，倒平板，熔化已经配制好并灭过菌的琼脂培养基，冷却至45℃左右倒平板。水平静置待冷却凝固。

步骤二，将待划线分离的平板倒置于煤气灯的左侧，贴上标签（或做记号），若划线时分区没把握，可在皿底上预先分为四个区。

步骤三，接种环烧红灭菌，并伸入菌种试管内冷却，挑取少量斜面菌苔。

步骤四，左手拿培养皿底，此时皿底尽量与桌面垂直，然后将接种环上的菌种先在平板的A区划3～5条平行线，再烧掉环上剩余的菌种。

步骤五，将烧红的接种环在平板培养基的边缘冷却。然后将平板转动一定角度（约60°），用接种环通过A区向B区做来回平行划线；同样，由B区向C区划线。最后由C区向D区划线。区与区的线条间的夹角最好成120°，这样可使D区的线条与A区线条相平行，并可避免此两区线条接触。最后将平板倒放在培养皿盖中。

划线用的接种环要圆滑。划线时，平板与接种环的角度要小一些，滑动要轻巧，线条要平行且密集，这样才能充分利用培养基的表面积。划线时，可把平板分成四个区，四个区的作用不同，所以四个区的面积也不相同，应是D＞C＞B＞AD区是关键，是单菌落的主要分布区。划D区内的线时，切勿再同A、B区的线条相接触。

培养:将培养皿倒置于37℃（或28℃）恒温箱或恒温室中培养，24h后观察分离效果。

选取单菌落及移种至斜面上:把D区或C区内出现的典型单菌落用接种针以无菌操作的要求挑取并移接到斜面培养基上，经培养后即为纯种微生物，佛山科普茵生物科技有限公司。返回搜狐，查看更多

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