酚类化合物高效液相色谱法(HPLC (C) |
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1.方法原理 在酸性(pH=2 )条件下,用GDX-502树脂吸附水中的酚类化合物,用碳酸氢钠水溶液淋洗树脂,去除有机酸,然后用乙睛洗脱、定容,液相色谱法分离测定。 2.干扰及消除 对于含油量较高的工业废水,可预先用正己烷萃取除去干扰。 3.方法的适用范围 本方法适用于水和废水中酚类化合物的测定。各组分的最低检测量为1-4ng。当富集水样的体积为1L、进样体积为10μl时,最低检测浓度为0.6-0.5μg/L。 4.仪器 ①液相色谱:具紫外检测器。 ②层析柱:90mm×60mm。 5.试剂 ①GDX-502树脂。 ②乙腈:色谱纯。 ③甲醇:色谱纯。 ④乙酸:分析纯。 ⑤丙酮:分析纯。 ⑥盐酸溶液:C (HCl) =6mol/L。 ⑦碳酸氢钠溶液:C (Na2CO3) =0.05mol/L。 ⑧苯酚、邻氯酚、对硝基酚、2, 4-二硝基酚、邻硝基酚、2, 4-二甲酚、4-氯间甲酚、2,4-二氯酚、4,6-二硝基邻甲酚、2, 4, 6-三氯酚和五氯酚标准溶液:先用甲醇为溶剂配制浓度为500-1000mg/L的标准贮备溶液,然后再用乙睛将其稀释至1-1mg/L。 6.步骤 (1)水样的采集与保存 将水样采集于棕色具塞硬质玻璃瓶中,装满,瓶中不能留有顶上空间和气泡。于冷暗处((4℃)保存。样品必须在7d内用树脂吸附,40d内进行分析。若水中有残留氯存在,每升水中加入80mg硫代硫酸钠,摇匀。 (2)色谱条件 色谱柱:Supelco silTMLC-18, 25cm×4.6mm, 5μm。 流动相:A:乙腈(含1%乙酸),B:水(含1%乙酸)。25min 梯度淋洗:流动相B 70%——→ 流动相B 20%,流速:1.00ml/min。 检测器:UV-280nm、290nrn。 进样量:l0μl。 (3)标准曲线的绘制 用高效液相色谱测量不同浓度各种酚标准溶液的峰高或峰面积,以各种酚的含量(mg/L)对应其峰高或峰面积绘制标准曲线。 (4)样品测定 ①树脂的纯化:树脂使用前应用精制的丙酮浸泡数日,数次更换新溶剂到丙酮无色。再用乙腈回流提取6h以上。纯化后的树脂密封保存在甲醇中备用。 ②层析柱的准备:首先在层析柱的活塞上部管内放少许干净的玻璃棉,然后湿法加入净化后的树脂,直至树脂床高约80mm。最后,在其上放一层玻璃棉(晃动以赶出柱中的气泡)。打开活塞放出甲醇,直到液面刚好达到树脂床顶部。用10ml乙腈分二次淋洗树脂,再用10ml水淋洗树脂,每次淋洗时都不要使液面低于树脂床。 ③样品富集:根据水中酚类化合物的含量,取水样50-1000ml(浓度高的水样,如车间废水,应适当稀释),用6mol/L盐酸调至pH=2。使水样以大约4ml/min的流速流经层析柱。当大量水样均流过柱子后,保持液面在树脂高度,用l0ml碳酸氢钠溶液,分两次淋洗层析柱。将水全部放出,并用吸耳球轻轻加压将柱中水尽量排净。 ④样品洗脱:用2.0ml乙腈淋洗层析柱,用细不锈钢丝活动树脂,以赶出柱中的气泡,平衡10min。打开柱活塞,待乙睛自然流动停止再加入3.0ml,将乙腈全部放出,并定容至5.0m1。 ⑤样品分析:用液相色谱法分离测定样品溶液中的各种酚。 定性分析:根据各组分的相对保留时间、不同波长下的吸收比及紫外光谱确定酚的种类。 定量分析:根据样品溶液中各组分的峰高或峰面积,由标准曲线得出酚的含量并计算水样中酚的浓度。 7.计算 水样中目标化合物浓度(μg/L )=Ci·V2/V1 式中:Ci——由标准曲线上查得的样品溶液中目标化合物浓度(mg几); V2——洗脱液体积(ml); V1——水样的体积(L)。 8.精密度和准确度 9.注意事项 (1)树脂的选择 据有关资料介绍,在中性介质中,XAD-2、XAD-4、GDX-101、GDX-301、GDX-402和GDX-502吸附树脂,对酚类化合物均有较强的富集效果。我们选择了GDX101、GDX301和GDX-502三种树脂作比较,实验结果表明,在酸性介质中,GDX-101对酚类的吸附效率较差,GDX-502和GDX-301较好。在本方法规定的实验条件下,GDX-502的吸附洗脱效果优于GDX-301。 (2)洗脱剂的选择 乙醚、二氯甲烷、二硫化碳、丙酮等都是使用较普遍的洗脱剂,但使用上述溶剂洗脱时,必须先浓缩蒸干,再用甲醇或乙腈定容后才能测定。由于酚易挥发,在浓缩蒸干过程中损失较大。选用乙腈为洗脱剂,洗脱定容后直接测定,干扰少,回收率较高。 (3)流动相的选择 可能由于甲醇易与酚类化合物形成氢键的缘故,用甲醇作流动相分离效果不好。 |
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