近几十年来，纳米医学领域在治疗应用方面取得了快速进展，在新型纳米颗粒中，细胞外囊泡(EVs)或外泌体（Exosomes），因其低免疫原性、可装载不同货物和改善组织特异性分布，可以被设计成天然药物递送的纳米载体，被誉为新一代药物递送载体。目前，大约有50个临床试验评估了天然或工程外泌体在不同治疗领域的安全性和有效性。

在进行外泌体研究或生产时，从优化原始细胞系开始到培养、收获条件、外泌体分离纯化方法及稳定性等等方面都需要仔细斟酌，因为外泌体质量和产量会因此受到很大影响。此外，需要对外泌体进行全面的质量控制，以最大限度地减少由于外泌体异质性造成的批与批之间的差异。

恩泽康泰在外泌体质量控制方面，建立了外泌体的定量、纯度、杂质评估、标志物marker检测如WB/纳米流式等、脂质双层膜结构检测、装载的内含物检测如流式/PCR/WB/ELISA/HPLC等、蛋白组检测、转录组检测、代谢组检测、安全性评估，超过50项质量控制项。基于此，结合外泌体研究中常见的质控项，我们现对外提供如下11项外泌体质量分析服务：

一、外泌体颗粒粒径分布和浓度

1、检测原理

粒径：以二氧化硅纳米颗粒为标准品，利用一系列粒径已知（经TEM表征）的二氧化硅纳米颗粒的混合物，建立散射光强度与颗粒粒径的标准工作曲线，即可将同等采样条件下EV的散射光强度转换为颗粒粒径。

浓度：通过检测特定时间内已标定浓度的荧光微球的个数，快速得到特定进样压力下样品流的体积流量，即可得到在相同进样压力条件下待测样品的颗粒浓度。

2、检测方法

纳米流式仪

3、结果展示

二、外泌体蛋白含量

1、检测原理

基于双缩脲原理，碱性条件下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，BCA（二喹啉甲酸）鳌合Cu+作为显色剂，产生蓝紫色并在562nm有吸收峰，单价Cu+与蛋白质呈剂量相关性。可以根据待测蛋白在562nm处的吸光度，与标准曲线对比，便可计算待测蛋白浓度。

2、检测方法

BCA定量试剂盒

3、结果展示

三、外泌体形貌

1、检测原理

经加速和聚集的电子束透射到预制备的非常薄的外泌体样品上，电子与样品中的原子碰撞而改变方向产生立体角散射。散射角的大小与样品的密度、厚度等相关，因此可以形成明暗不同的影像，经放大、聚焦后在荧光屏上显示出外泌体的影像。

2、检测方法

透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope, 简称TEM）

3、结果展示

四、外泌体三阳一阴蛋白标志物

1、检测原理

通过抗体对凝胶电泳处理过的外泌体样本进行特异性结合，并通过HRP标记的二抗级联放大检测信号，经过底物化学发光试剂（如ECL）发光以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

2、检测方法

免疫印迹法，Western Blot，WB

3、结果展示

五、外泌体Zeta电位检测

1、检测原理

在样品的两端加一个电场，导致颗粒加速运动，散射的激光因为颗粒运动而产生频率变化（多普勒效应），散射的激光和原始光源之间的相干产生一个调制的信号，分析频率变化可以计算电泳迁移率，通过Henry方程计算粒子在该体系中所带的电荷情况（Zeta电位），-500mV-500mV。

2、检测方法

动态光散射粒度测定仪

3、结果展示

六、无菌检测

1、检测原理

用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法，无菌检查是通过目检微生物在培养基中的生长来判断结果，若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明供试品在该检验条件下未发现被微生物污染。

2、检测方法

培养基培养法

3、结果展示

样品未见菌生长

七、支原体检测

1、检测原理

若外泌体被支原体污染，支原体DNA的保守序列会被大量、快速地扩增，使反应液由蓝紫色变成天蓝色，结果肉眼可辨，可以对常见的8种支原体进行快速检测。

2、检测方法

试剂盒法

3、结果展示

八、有膜颗粒占比

1、检测原理

Triton-100具有破膜功能，可对有膜颗粒如外泌体进行裂解，而对无膜颗粒无影响，通过Triton-100裂解后便可检测外泌体样品中有膜颗粒占比，是外泌体纯度的另一种反映。

2、检测方法

纳米流式检测裂解前后的颗粒

3、结果展示

九、蛋白标志物（CD63/CD81/CD9）阳性占比

1、检测原理

外泌体上有CD81/CD63/CD9标签蛋白，分别使用荧光标记的CD81/CD63/CD9抗体与外泌体一起孵育结合后会产生较强荧光，纳米流式仪能够完全区分散射光和荧光，进而检测出带有CD81/CD63/CD9蛋白的外泌体颗粒阳性占比。从而反映出外泌体的纯度，或不同来源/不同纯化方式/特殊处理下的外泌体的表面标志蛋白阳性占比。

2、检测方法

纳米流式

3、结果展示

十、目的蛋白标签阳性占比

1、检测原理

外泌体上的目的蛋白连接有FLAG等标签，使用荧光标记的FLAG等抗体与外泌体孵育结合后会产生较强荧光，纳米流式仪器能够完全区分散射光和荧光，进而检测出带有目的蛋白的外泌体颗粒阳性占比。这种定量方式一方面可以反应外泌体蛋白表面工程化的效率，从单颗粒水平评估的结果更准确。另一方面跟WB定性检测互为补充。此外也可避免繁琐的不同蛋白WB检测时的抗体测试优化。

2、检测方法

纳米流式

3、结果展示

十一、HPLC-SEC检测

1、检测原理

外泌体：在特定波长下有特征荧光信号，外泌体包裹的蛋白和核酸在紫外280nm和紫外260nm下有弱吸收峰，在特定保留时间下出峰。

蛋白：紫外280nm下出峰

核酸：紫外260nm下出峰

SEC色谱柱后连接HPLC，便可在不同检测器下检测外泌体、蛋白和核酸杂质的峰图，进而考察外泌体的纯度指标，排除体系中杂质（蛋白、核酸）的干扰。而常规的有膜颗粒占比或particle/蛋白等纯度指标无法对杂质的成分及含量进行评估，因此HPLC-SEC是衡量外泌体纯度的重要检测方法。

2、检测方法

HPLC

3、结果展示

综上，恩泽康泰可以对外提供的外泌体质量分析包括，外泌体颗粒粒径分布和浓度、蛋白浓度、外泌体形貌的TEM检测、三阳一阴蛋白标志物WB检测、Zeta电位检测、有膜颗粒占比、无菌检测、支原体检测、蛋白标志物（CD63/CD81/CD9）阳性占比检测、目的蛋白标签阳性占比检测、HPLC-SEC检测，共计11项。

针对文章中常用的表征和质量检测我们分为常见的标准表征、表征Plus和纯度表征三个模块，想知道您的外泌体质量如何？快快把样本送过来我们帮您揭秘吧。