但凡涉及生物医学领域研究，通过Western Blot检测蛋白水平是基本操作，其结果直接影响到课题结论和文章质量。然而，做WB实验的小伙伴，特别是新手小白，不可避免会遇到一些奇怪结果（如上图右）。比如已经做了蛋白定量，内参条带还是不齐，内参出现异常双条带，或者曝光背景很黑，条带泛白，marker显示条带等等问题，这些情况该怎么解决？大师兄为大家整理了一份WB问题解决对策，助你跑出完美WB结果。

下面我们结合图片展示WB结果中的最常见10类问题给出分析及处理对策：

1.背景高（条带整体很黑）

左侧是高背景结果图、右侧是改善条件之后的结果图

原因及处理对策如下：

2.信号低或无信号（无条带）

左侧是低信号结果图、右侧是改善条件之后的结果图

原因及处理对策如下：

3.非特异条带（有杂带）

左侧是非特异结果图、右侧是改善条件之后的结果图

原因及处理对策如下：

4.条带位置错误（条带不在预期分子量位置）

原因：在目标位置上方存在多个条带，说明蛋白形成了多聚体，或存在蛋白修饰。

处理对策：增加蛋白变性时间。

5.条带斑点样缺失（条带上有白斑）

左侧是条带斑点样缺失结果图、右侧是改善条件之后的结果图

原因：转膜过程中出现气泡

处理对策：转膜时将气泡排除干净。

6.条带不完整（条带中间凹陷，两边高）

左侧是条带不完整结果图、右侧是改善条件之后的结果图

原因：曝光时发光液在膜上不均匀

处理对策：将条带浸没在发光液中曝光。

7.微笑样条带（条带弯曲）

左侧是微笑样条带结果图、右侧是改善条件之后的结果图

原因：电泳过程蛋白迁移太快，过热

处理对策：降低电压并在低温条件电泳。

8.条带发白

左侧是条带发白结果图、右侧是改善条件之后的结果图

原因：蛋白上样量过大或HRP过多；

处理对策：减少蛋白上样量，或增大二抗稀释比例。

9.非特异黑色杂斑

左侧是非特异黑色杂斑结果图、右侧是改善条件之后的结果图

原因及处理对策如下：

10.Marker曝光显示黑色条带

蛋白marker也曝光出来黑色条带

原因：抗体与蛋白marker特异性反应；

处理对策：在marker和相邻样本泳道之间加一个空白孔。

对于更多WB结果中非常见问题处理，我们给大家准备了一份整理好的WB实验结果中可能遇到的101种问题及其处理对策PDF文件，需要的小伙伴可以关注BioAdvance，回复WB，免费获取~