Western blot所必须的内参及标签抗体 ――衡量WB成功的标尺 |
您所在的位置：网站首页 › wb内参一定要齐吗 › Western blot所必须的内参及标签抗体 ――衡量WB成功的标尺 |
Western blot所必须的内参及标签抗体 ――衡量WB成功的标尺
|
Western blot所必须的内参及标签抗体 ――衡量WB成功的标尺
来源：
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
2022-2-9
访问量：13811评论(0)
Western blot所必须的内参及标签抗体 ——衡量WB成功的标尺
何为内参抗体、何为标签抗体？ 一 内参抗体 内参即内部参照（Internal Control），类似于荧光定量实验的内参基因，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由看家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在不同组织和细胞中的表达相对恒定，常用它作为检测目的蛋白表达水平变化时来做参照物。
2内参抗体的选择： （1） 样本种属来源 l 哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、NaK、Atpase等。 l 植物来源实验样本，则可以选择plant actin、Rubisco等。 l 根据来源样本选择不同的内参，是WB实验成功的关键。也可参照文献报导，选择合适的蛋白作为内参。 （2）目的蛋白分子量 选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5 KD以上。比如目的蛋白分子量为45 KD，此时不适宜选择β-actin（43 KD）作为内参，可以考虑选择GAPDH或者β-tubulin作为内参。 （3）内参蛋白的表达部位
图1 不同部位内参蛋白展示图 二 标签抗体 标签抗体的组成一般分为蛋白标签和目的蛋白两部分。标签抗体的合成主要是将蛋白标签是利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。标签抗体（Tag Antibody）可用于检测和纯化各种商品化表达载体上的标签序列，分析目的蛋白的表达含量及其功能。其原理是抗原—抗体反应，这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签融合蛋白。 标签抗体的选择可遵循以下原则： l 检测蛋白A+His标签，选择抗His抗体；检测蛋白B+MBP标签，选择抗MBP抗体； 标签抗体是开展基因蛋白表达、信号转导和基因功能研究的常用工具。随着技术的不断发展，相继开发得到具有各种不同功能的蛋白标签，常见的蛋白标签有His、Flag、GST、MBP、HA、Myc、GFP 等。 表1 不同标签功能介绍 融合标签 大小（KD） 功能 是否切除 HIS 0.84 有利纯化，能纯化可溶性/包涵体蛋白 小标签，不影响蛋白功能 GST 26 增强可溶性，仅能纯化可溶性蛋白 大标签，需切除 MBP 44.4 增强可溶性，减弱毒性蛋白 大标签，需切除 NusA 55 增强可溶性，减弱毒性蛋白 大标签，需切除 SUMO 11.2 增强可溶性，减弱毒性蛋白 大标签，需切除 三 翊圣标签抗体与内参抗体 标签抗体 货号 名称 分子量 应用 WB稀释比例 价格（元） 30503ES20 Flag-Tag, Mouse mAb 20μl IF,WB,IP 1:1000-1:5000 248 Flag-Tag, Mouse mAb 100μl IF,WB,IP 1:1000-1:5000 748 Flag-Tag, Mouse mAb 1ml IF,WB,IP 1:1000-1:5000 3287 Flag-Tag, Mouse mAb 5ml IF,WB,IP 1:1000-1:5000 13687 30401ES50 His-tag, Mouse mAb 50µl ELISA, IF, WB, IP 1:2000-1:20000 688 30601ES60 Myc-tag, Mouse mAb 100μl ELISA, IF, IP, WB 1:5000 748 30701ES60 HA-Tag, Mouse mAb 100μl WB, IP 1:10000 748 30901ES50 GST-tag, Mouse mAb 50μl ELISA, WB, IP 1:5000-50000 688 内参抗体 货号 名称 规格 应用 WB稀释比 价格（元） 30101ES50 β-actin, Mouse mAb 50 µl ELISA, IF, WB, IHC, FC, IP 1:5000-50000 688 30102ES60 β-actin, Rabbit pAb 100 ul ELISA, IF, WB, IHC 1:1000-10000 998 30201ES60 GAPDH (Clone:1A6), Mouse mAb 20 µl ELISA, IF, WB, IHC 1:10000 738 30202ES60 GAPDH, Rabbit pAb 100 ul WB 1:2000 588 30301ES60 β-Tubulin, Mouse mAb 100 µl IF, WB, IHC ,IP 1:1000 948 30302ES60 β-Tubulin, Rabbit pAb 100 µl IF, IHC, IP 1:5000-10000 748 30304ES60 α-Tubulin, Rabbit pAb 100 µl WB, IF, IHC, IP 1:5000-10000 948 其他常用内参类型推荐 货号 名称 分子量 品牌 细胞核膜 Lamin A/C 65-75 KD 代理品牌 Lamin B1 66-72 KD 代理品牌 细胞核 YY1 65-70 KD 代理品牌 TBP 33-43 KD 代理品牌 Histone H3 15-17 KD 代理品牌 PCNA 36 KD 代理品牌 胞浆或全细胞 GAPDH 36 KD 代理品牌 β-actin 42 KD 代理品牌 Vinculin 117 KD 代理品牌 β-Tubulin 50-55 KD 代理品牌 α-Tubulin 50-55 KD 代理品牌 膜蛋白 ATP1A1 97-110 KD 代理品牌 线粒体 COX412 17-20 KD 代理品牌 COX411 17-20 KD 代理品牌 Porin 31-37 KD 代理品牌 全血/血浆/血清 Albumin 66 KD 代理品牌 四 标签抗体标记的蛋白纯化产品 1 Anti-Flag亲和纯化凝胶 Anti-Flag亲和纯化凝胶由高质量的鼠源 IgG2b单克隆抗体与Sepharose 4B gel 通过供价偶联制备，本产品具有较高的Flag标签融合蛋白加载容量（至少为1.1mg protein/ml gel），杂蛋白非特异结合少，可用于蛋白质免疫沉淀（IP）和蛋白质纯化。 Anti-Flag亲和纯化凝胶可结合Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-FLAG–Protein），N端Flag 融合蛋白（FLAG–Protein），C端Flag 融合蛋白（Protein-FLAG）。
图2 Anti-Flag亲和纯化凝胶IP后蛋白电泳图 1, 国外品牌 2,Yeasen；抗体浓度：7.5mg抗体/ml凝胶；蛋白结合量：1.25mg蛋白/mL凝胶；蛋白纯度：＞95%
图3 不同品牌Flag凝胶价格比对图 货号 名称 规格 价格 20585ES03 Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag亲和纯化凝胶） 1ml 1487 20585ES08 Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag亲和纯化凝胶） 5ml 4797 20585ES25 Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag亲和纯化凝胶） 25ml 20987 20585ES60 Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag亲和纯化凝胶） 100ml 76187 2 琼脂糖凝胶偶联标签抗体 琼脂糖凝胶偶联标签抗体由高质量的鼠源单克隆抗体与Sepharose 4B gel 通过供价偶联制备，具有较高的标签融合蛋白加载容量，杂蛋白非特异结合少，可用于蛋白质免疫共沉淀和少量蛋白质纯化。 货号 名称 规格 价格（元） 20586ES03/20586ES08 Anti-HA Affinity Gel （Anit-HA亲和纯化凝胶） 1ml/5ml 1487/4797 20586ES25/20586ES60 Anti-HA Affinity Gel （Anit-HA亲和纯化凝胶） 25ml/100ml 20987/76187 20587ES03/20587ES08 Anti-Myc Affinity Gel （Anti-Myc标签亲和纯化凝胶） 1ml/5ml 1487/4797 20587ES25/20587ES60 Anti-Myc Affinity Gel （Anti-Myc标签亲和纯化凝胶） 25ml/100ml 20987/76187 20588ES03/20588ES08 Anti-V5 Affinity Gel （Anti-V5标签亲和纯化凝胶） 1ml/5ml 1487/4797 20588ES25/20588ES60 Anti-V5 Affinity Gel （Anti-V5标签亲和纯化凝胶） 25ml/100ml 20987/76187 20589ES03/20589ES08 Anti-His Affinity Gel （Anti-His标签亲和纯化凝胶） 1ml/5ml 1487/4797 20589ES25/20589ES60 Anti-His Affinity Gel （Anti-His标签亲和纯化凝胶） 25ml/100ml 20987/76187 3 标签多肽 蛋白标签是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。Yeasen公司推出的标签多肽可用于与带有相应标签的蛋白竞争性结合anti-标签单抗，以达到纯化标签融合蛋白的目的。 货号 名称 规格 价格（元） 20571ES11/20571ES25 3X Flag-tag Peptide （3X Flag-tag重复多肽） 4mg/25mg 2157/9537 20572ES11/20572ES25 Flag-tag Peptide （Flag-tag多肽） 4mg/25mg 1237/5587 20573ES08/20573ES25 c-Myc Tag Peptide（c-Myc Tag多肽） 5mg/25mg 1237/5587 20574ES08/20574ES25 HA Tag Peptide（HA Tag多肽） 5mg/25mg 1237/5587 20575ES08/20575ES25 V5 Tag Peptide（V5 Tag多肽） 5mg/25mg 1237/5587 20576ES08/20576ES25 6X His Tag Peptide（6X His Tag多肽） 5mg/25mg 2557/11837 20577ES08/20577ES25 S-Tag (Pancreatic RNase A derivtive) Peptide（S-Tag 多肽） 5mg/25mg 2557/11837 20578ES08/20578ES25 T7 Tag Peptide（T7 Tag多肽） 5mg/25mg 2557/11837 20579ES08/20579ES25 VSV-G Tag Peptide（VSV-G Tag多肽） 5mg/25mg 2157/9537 20580ES08/20580ES25 X-press Tag Peptide（X-press Tag多肽） 5mg/25mg 2157/9537
HB200525 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 商家主页地址：上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元 联系人：李自转 电话：400-6111-883、021-34615995-8075 传真：021-34615995-188 Email：[email protected]
|
【本文地址】
今日新闻 |
推荐新闻 |