原标题：期刊不让裁膜，那我的 WB 实验怎么办

「我在实验室走过最远的路，就是 WB 的弯路……」

从开始的组织研磨，到样品制备、蛋白定量……几乎所有的坑都能踩上一遍。

熟悉流程后进一步实验，依旧面临了不少问题：比如最近， 我们要在同一张膜上研究多个蛋白的表达，用什么实验方法就把我难住了。

第一时间想的是裁膜，但师兄提醒：现在越来越多的期刊要求提供未剪切的 Blot 图。

Stripping&Reprobing？师兄说：这种办法因可能存在过度 Stripping 或 Stripping 不足，从而导致准确性低和重复性低。

那怎么办？ 师兄让我尝试一下多色荧光 Western Blot。

但我知道多色荧光 Western Blot 实验有局限呀，受制于仪器、荧光抗体，通常只能同时检测 2～3 个蛋白条带，根本不够用……

现在不用纠结啦，为了扩展多色荧光 Western Blot 的应用范围， Bio-Rad 近期在其全能型成像系统 ChemiDoc MP 上开发了 5 色荧光实验方案，除去内参蛋白后，最多还可以实现 4 个目的蛋白的同时检测。

这一新的流程发表在《Current Protocols in Pharmacology》上，使用 Bio-Rad ChemiDoc MP 全能型成像系统与 5 种一抗，4 种二抗共同实现。同时检测了 USP2、AKR1C2、TP1、SOD1 四种目的蛋白，及内参蛋白 tubulin。

五荧光通道检测结果：

五个单独通道结果：

使用的一抗及稀释比例为：

使用的荧光二抗/streptavidin 及稀释比例为：

具体实验流程请参考文献：

Fluorescent Western Blotting: High Sensitivity Detection of Multiple Targets, Current Protocols in Pharmacology e72, Volume 88

* 本产品仅限科研使用，不作为临床诊断。

* Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories, Inc. 在特定区域的商标。

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图文来源：伯乐生命科学

题图来源：站酷海洛返回搜狐，查看更多

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