c-Myc是一种作用广泛的转录调节因子，可以在增殖、分化和凋亡等多种细胞过程中发挥调节作用。同家族成员还包括v-Myc、n-Myc和l-Myc。

   c-Myc是最常见的原癌基因之一，它的表达在肿瘤中经常上调。通常认为c-Myc激活能够诱导人类肿瘤的发生，所以严格调控c-Myc至关重要。c-Myc的表达由有丝分裂信号诱导并由生长抑制信号抑制。

   c-Myc的主要调节作用是通过与Max蛋白结合发生的，Max是一种相对稳定的蛋白质，但c-Myc 会迅速降解，半衰期为20-30分钟。

   c-Myc作为体细胞重编程的调控因子，与Sox2、Oct4和KLF4一起调控已分化的细胞重新编程为胚胎样状态。

   c-Myc作为一种转录调节因子，组织特异性低，在多种肿瘤细胞中高度表达。

   不同样本中c-Myc的表达量存在差异，选择合适的样本进行实验非常重要。

   c-Myc为内源性蛋白，请区分c-Myc与Myc标签之间的区别。

   细胞核。

   人（P01106）：异构体 1-2：49 kDa （预测）

   小鼠（P01108）：49 kDa （预测）

   大鼠（P09416）：49 kDa （预测）

   c-Myc多个位点存在磷酸化修饰

   乙酰化修饰

   泛素化修饰

   糖基化修饰

​WB实验贴士

   ab32072抗体只能用于内源性c-Myc蛋白的检测，它不会检测Myc标签。

   c-Myc组织特异性低，不同样本中蛋白的表达量存在差异，有些样本可能会出现弱表达或无表达的情况。请选择合适的实验样本，检测前需要确认靶标蛋白表达量，若表达量较低，建议尝试对实验条件进行优化：比如降低稀释度，增加上样量，使用高敏底物等。

   强烈推荐使用阳性对照，以确认实验体系没有问题。

   c-Myc存在多种翻译后修饰，常出现实际检测分子量与预测条带大小不符，或者两条条带现象。

   重组人源c-Myc蛋白(ab169901)

   Jurkat、HeLa细胞系

   人MYC (c-Myc) knockout HEK-293T cell裂解物(ab263850)

关键控制点

     在实验中除了需要注意常规问题外，还要特别关注以下关键控制点：

  样本制备

     添加复合蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。

     检测磷酸化c-Myc蛋白，建议在裂解液中添加复合磷酸酶抑制剂。

     超声破碎处理细胞以富集靶标蛋白。

     通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。

   电泳

     至少上样20μg总蛋白进行电泳。

     我们强烈建议您在进行新的WB实验时使用阳性裂解液作为对照。

   转膜

     建议不要裁膜，保留全膜或至少 90kDa以下膜来孵育此抗体。

     PVDF膜激活完成后充分清洗，完全去除膜上残留甲醇。

     强烈建议转膜完成后使用丽春红染色，确定转膜是否成功。

   抗体孵育

     请根据产品说明书选择合适的抗体工作浓度。

     建议使用新鲜抗体，不建议抗体重复利用。

   c-Myc在不同样本中蛋白的表达量存在差异，有些样本可能会出现弱表达或无表达的情况，请选择合适的实验样本。

   强烈推荐使用阳性对照，以确认实验体系没有问题。

   人结肠腺癌组织

     在实验中除了需要注意常规问题外，还要特别关注以下关键控制点：

  样本固定

     样本固定时间取决于组织块大小与组织类型，但对于大多数样本，例如使用4%PFA固定，室温固定18-24小时较为合适。

   封闭

     如使用荧光基团偶联的二抗进行实验，推荐使用添加1%的BSA和终浓度为0.3M甘氨酸的封闭液，以淬灭醛基引起的自发荧光。

     如后续使用HRP结合物进行检测，请使用3%过氧化氢处理切片10分钟以封闭内源性过氧化物酶。

   抗原修复

     对石蜡切片进行免疫组化实验时，请根据说明书选择合适的抗原修复液。我们建议使用高压锅进行热诱导抗原修复。可以尝试110℃修复切片15分钟。