实验三、黄

体酮原

料药的鉴别与质量分析

一、

目的要求

1.

复习并掌握甾体类药物鉴别反应的实验原理；

2.

熟悉高效液相色谱的工作原理、仪器构造及操作方法；

3.

掌握高效液相色谱法测定药物含量、检查药物杂质的操作方法；

4.

复习并掌握内标法定量法的计算方法。

二、仪器及试药

1.

器材

Agilent 

1100 

和

Agilent 

1200 

高效液相色谱仪，超声波，电热恒温干燥箱，万分之一分析天平，称量

瓶，

称量纸，

试管，

容量瓶

（

25 mL

、

50 mL

、

10 mL

）

刻度吸管

（

5 mL

、

2 mL

）

，

平头微量注射器

（

25 uL) 

，

烧杯（

50 mL

）

2.

试药

黄体酮原料药，己烯雌酚，超纯水，异烟肼，甲醇（色谱纯）

，盐酸（分析纯）

，亚硝基铁氰化钠（分

析纯）

，碳酸钠（分析纯）

，醋酸铵（分析纯）

，甲醇（分析纯）

三、实验准备及条件

稀盐酸：取浓盐酸

23.4 mL

，加水稀释至

100 mL

，即得。本液含

HCl

应为

9.5%-10.5%

。

色谱柱（

XDB-C

18

）

颗粒度为

5 um

的固定相，长

150 mm 

内径

4.6 mm 

流动相

甲醇

: 

水

= 65 : 35

，流量

1 mL/min 

检测器

紫外光度检测器，

254 nm

进样量

10 uL 

四、实验原理

（一）

、鉴别

1.

酮基的反应：黄体酮分子结构中含有酮基，能与异烟肼等羰基试剂反应呈色。反应式如下：