核酸电泳工作流程

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核酸电泳工作流程

2024-02-09 12:16| 来源: 网络整理| 查看: 265

Ladde 类型(例如DNA或RNA),片段结构(例如单链或双链),构象(例如超螺旋、开环或线性)以确保对迁移进行适当比较(了解更多: 结构和构象对样品迁移性的影响)片段的数量和适当的分离形式,用于大小的估计预期用途,如分子量标准是设计用于定性分析还是精确的 定量测定不同类型凝胶适用的分子量标准(例如,部分预制凝胶推荐设计 特定分子量标准以获得最佳运行结果)上样染料的性质,避免目的条带 模糊(图6)上样缓冲液与使用凝胶的兼容性(例如,缓冲液的盐浓度会影响样品的迁移)

早期,DNA的大小标准主要来源于病毒基因组片段(例如,λφX174)和细菌质粒(如pUC19)的限制内切。 该标准物在内切、样品纯度和电泳中带型的重现性方面存在问题。 而后,从连接反应和/或PCR中获取的含有片段的分子量标准,因具有再现性且可产生预期大小的片段,而备受青睐。 如今,因为色谱纯化片段实现了质量、带型、强度和数量等方面的更高控制,被视为分子量标准黄金标准(图6)。

此外,还设计出 室温下稳定、适合运输和储存,以及方便和少环境影响的分子量标准。 而预混合,即用型分子量标准也 可供选择—添加了最佳浓度、可直接上样到凝胶的上样染料的分子量标准。

注意,由不同制造商生产、描述相同(例如,1kb或100 bp)的分子量标准,包含DNA片段的数量、大小和密度可能会有所 不同(图7)。 使用前,请参考制造商提供的指南和协议,获取分子量标准组成及其使用用途准确而详细的说明。

与DNA 分子量标准不同, RNA 分子量标准 通常与含有变性剂的上样缓冲液一同提供。 变性剂可维持RNA的单链形式,确保样品 可预测的迁移 和分离结果。 当运行RNA凝胶电泳时,应避免使用DNA分子量标准,因为双链分离,在变性条件下使用会导致非规则方式分离。



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