SDS-PAGE 

一

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实验原理

SDS 

是一种阴离子表面活性剂，在蛋白质溶液里加入

 SDS 

和巯基乙醇后，

巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原，

 SDS 

能使蛋白质的氢键、疏水键打

开并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质

-SDS 

复合物。在一定条件下，

SDS 

与大

多数蛋白质的结合比例为

 1.4:1

。由于十二烷基磺酸根带负电，使各种蛋白质的

SDS-

复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质原有的电荷

量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。

SDS

与蛋白质结合后，还

引起了蛋白质构象的改变。蛋白质

-SDS

复合物的流体力学和光学性质表明，它

们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的

 SDS 

复合物

的短轴长度都一样，约为

 1.8nm 

，而长轴则随蛋白质的

 Mr 

成正比的变化。基

于上述原因，蛋白质

-SDS 

复合物在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电

荷和形状的影响，而只与椭圆棒的长度有关，

也就是蛋白质

 Mr 

的函数。

二

. 

试剂器材

30%

凝胶贮液

(100mL)

：

称取试剂

Acr 29.2g

和

Bis 0.8g

置于

100mL

烧杯中，向烧杯

中加入约

60mL

双蒸水，充分搅拌溶解后加双蒸水定容至

100mL

，置于棕色瓶内

4

℃

贮存，每过

1-2

个月应重新配制；

注意：丙稀酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，

其作用有积累性，配制时应戴

手套和口罩等。

分离胶缓冲液

(1.5 mol/L Tris-HCl

，

pH 8.8

，

100mL)

：

称取

Tris 18.2g 

溶于约

80mL

双蒸水，用

6mol/L

的

HCl 

调整

pH

值至

8.8

，加双蒸水定容到

100mL

，4℃ 贮存；

堆积胶缓冲液

(0.5 M Tris-HCl

，

pH 6.8

，

100mL)

：

称取

Tris 6.0g

溶于约

80mL

双蒸

水，用

1mol/L

的

HCl 

调整

pH

值至

6.8

，加双蒸水定容到

100mL

，4℃ 贮存；