木本植物蛋白提取和

SDS

-

PAGE

分析

方法的比较和优化

①

1

谷瑞升

2

刘群录

2

陈雪梅

2

蒋湘宁

②

1

(

中国科学院植物研究所

北京

100093

)

2

(

北京林业大学森林生物实验中心

北京

100083

)

摘要

在几种木

本植物上

对

4

种常用蛋

白提取方法

、

4

种凝胶染

色和脱色

方法及影响

蛋白定量和

SDS

-

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电泳的因素进行了比

较研究

,

发现

:

利用改良丙酮沉

降法提取

蛋白

,

不仅提

取效率

高

,

而且杂质

干

扰少

,

得到的电泳结果

,

蛋白条带清晰

,

数量多

;

将常规凝胶染色和脱色液中的乙醇改用为

甲醇可大

大改

善染色和脱色效果

,

获得了没有背景或背景很

浅的电泳结

果

。

通过研

究确定

了一套

优化的

适用于木

本

植物的蛋白提取

、

定量

、

凝胶制备

、

电泳

、

染色

、

脱色

以及干

胶制备

的方法

。

利

用这一

优化方

法对胡杨

细

胞盐胁迫蛋白进行了研究

,

发现了与高水

平盐胁

迫有关

的

66

kD

蛋白

和与盐

胁迫和

干旱胁

迫均有关

的

28

kD

蛋白

,

获得了满意的蛋白

SDS

-

PAGE

分析结果

。

关键词

木本植物

,

蛋白提取

,

十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳

COMPARIS

ON

AND

OPTIMIZATION

OF

THE

METHODS

ON

PROTEIN

EXTRACTION

AND

SDS

-

PAGE

IN

W

OODY

PLANTS

1

GU

Rui

-

Sheng

2

LIU

Qun

-

Lu

2

C

HE

N

Xue

-

Mei

2

JI

ANG

Xiang

-

Ning

1

(

Institute

of

Botany

,

The

Chines

e

Ac

ademy

of

Scie

nce

s

,

Beijing

100093

)

2

(

Expe

rimental

C

ente

r

of

Fores

t

Bi

ol

ogy

,

Beijing

Fore

st

Unive

rsit

y

,

Beijing

100083

)

A

bstract

The

methods

of

pr

otein

extraction

and

SDS

-

PAGE

were

compared

and

optimized

in

woody

plants

.

The

impr

oved

steps

included

modified

protein

extraction

,

substitution

of

ethanol

for

methanol

in

the

solution

of

staining

and

destaining

.

Satisfied

results

were

achieved

in

the

application

of

the

optimized

method

to

the

protein

analysis

of

several

woody

plants

.

66

kD

protein

band

related

to

salt

stress

and

28

kD

protein

band

associated

with

osmotic

stress

were

obviously

showed

out

in

the

analy

-

sis

for

the

suspensivly

cultured

cells

stressed

with

NaCl

of

Populus

euphratica

.

Key

words

Woody

plants

,

Protein

extraction

,

SDS

-

PAGE

SDS

-

PAGE

(

十二烷基磺酸钠

-

聚丙烯酰胺凝胶电泳

)

是分析生物体蛋

白质常用的方

法

,

其技术多采用

Laemmli

(

1970

)

分析细菌蛋白的方法

。

由于木本植物组织中的色素

、

酚

、

醌等次生代谢物质较细菌和草本植物中的多

,

因而

SDS

-

PAGE

分析受到了很大的干扰

,

加

之蛋白提取

、

定量以及凝胶染色

、

脱色方法多种多样

,