独一味基因表达

SYBR Green Ⅰ荧光定量

PCR

检测方法的

建立

杨晓丽

;

罗桂花

;

陈志

;

乔枫

【摘

要】

为了建立一种检测独一味

mRNA

表达水平的

SYBR Green Ⅰ荧光定量

Real-Time PCR

方法

.

根据独一味查尔酮合成酶

(LrCHS)

和苯丙氨酸解氨酶

(LrPAL)

基因序列设计特异性引物

,

运用

Real-Time RT-PCR

方法建立独一味基因的荧光定

量标准曲线

,

进一步研究独一味

CHS

和

PAL

基因在不同组织中的表达

.

结果显示

,

扩

增曲线在

1×105～1×1011 

copies/

μ

L

范围内有很好的线性关系

,

扩增相关系数在

0.995

以上

.

熔解曲线分析表明

,

产物为特异单峰

,

无引物二聚体

,

具有较高的特异性和

灵敏度

.

独一味

CHS

基因在不同组织中表达量顺序为花＞叶＞叶柄＞根＞茎

,PAL

基因表达量顺序为叶柄＞叶＞花＞根＞茎

.

建立的检测方法能够成功用于独一味

CHS

和

PAL

基因表达的检测

,

为研究独一味在

mRNA

水平的定量分析提供技术平

台

.

【期刊名称】

《广东农业科学》

【年

(

卷

),

期】

2014(041)012

【总页数】

6

页

(P133-137,

前插

2)

【关键词】

独一味

;SYBR G

reen Ⅰ;荧光定量

RT-PCR;CHS;PAL

【作

者】

杨晓丽

;

罗桂花

;

陈志

;

乔枫

【作者单位】

青海师范大学生命与地理科学学院

/

青藏高原资源与环境教育部重点

实验室

,

青海西宁

810008;

青海师范大学生命与地理科学学院

/

青藏高原资源与环境