原标题：艾美捷核糖核酸酶 A特异性和技术说明

历史背景：

琼斯在1920年的工作通常被认为是胰腺核糖核酸酶的“开始”（Richards and Wycoff 1971）。RNase于1938年由Dubos和Thompson分离，并于1940年由Kunitz结晶。

1947年，沃辛顿成为第一家生产高度纯化的结晶RNase的公司。在1950年代初期，Armour公司制备了粗结晶酶，并以非常实惠的价格提供。在 1960 年代和 1970 年代，RNase A 是研究的最爱，主要是因为它非常热稳定，并且以高浓度存在于可访问的来源牛胰腺中。这些研究导致了晶体结构的阐明（Anfinsen 1959，Groves 1966和Scheraga 1967），氨基酸序列的测定（Smyth等人，1963），催化机制的鉴定（Beers 1960），以及折叠途径的澄清（Hantgan等人，1974）。RNase A是确定正确氨基酸序列的第一种酶和第三种蛋白质（Raines 1998）。

与RNase研究相关的工作获得了四项诺贝尔奖（Anfinsen，Moore，Stein和Merrifield）。大量的文献和大量的研究使RNase成为20世纪研究最广泛的酶（Raines 1998）。

最近的工作继续研究活细胞内质网中RNase的合成和成熟（Geiger等人，2010）。研究RNA酶的折叠和聚集也仍然有很多工作要做（Benito等人，2008年，Iwaoka等人，2008年，Arai 等人，2010年）。正在研究该酶在癌症发展和基因调控中的作用（Shlyakhovenko 2009），并且正在开发成癌症化疗剂（Chao等人，2010）。

艾美捷核糖核酸酶 A（WBC-LS003435）特异性：

RNase A对嘧啶核苷键具有特异性（Volkin和Cohn 1953）。反应被认为分两步进行。第一步，裂解3'，5'-磷酸二酯键，同时生成2'，3'-环磷酸二酯中间体。在第二步中，环磷酸二酯被水解成3'-单磷酸基团。第一步是关于底物的含氮碱的非特异性;然而，第二步对于末端为2'，3'-环磷酸盐的嘧啶核苷酸是绝对特异性的。RNase B与RNase A对环胞苷酸和酵母RNA具有相同的特异性（Plummer和Hirs 1963）。RNase A显示出对较大底物的偏好（Nogués等人，1995）。

该酶在胞苷残基处的切割速度是尿苷残基的两倍（Richards和Wyckoff 1971）。Thr45被发现对介导嘧啶特异性最重要，既通过与嘧啶碱形成氢键，又在空间位上排除嘌呤碱（del Cardayré和Raines 1994）。Asp83的侧链对于稳定含尿苷底物裂解过程中的过渡态很重要;这种残留物对胞苷切割的动力学没有影响（del Cardayré和Raines 1995）。

核糖核酸酶 A（WBC-LS003435）技术说明：

应特别注意酶的处理，因为它与玻璃表面的亲和力。该酶保持活性，但在冻干时聚集，并在低离子强度的温度≥2°C的溶液中聚集。RNase A的加热溶液使DNA酶失活可能不令人满意，因为如果发生沉淀形成并且热处理的DNase可能会随着时间的推移重新激活，RNA酶活性可能会丧失。代码： RPDF 适用于需要最低 DNase 和蛋白酶水平且无需进一步处理的应用。代码： RAF在某些应用中无需处理即可使用。要热处理 RAF，请使用 10mM 乙酸盐 pH 5.0 和或不带 15mM CaCl 2 在 15°C 或更长时间下在 100°C 下 80 分钟。 如果在中性pH下加热，可能会沉淀。代码的热处理：由于磷酸盐的存在，RASE会沉淀。

核糖核酸酶 A部分引用文献：

Alonso, J. , Nogues, M. and Cuchillo, C.

Modification of Bovine Pancreatic Ribonuclease A with 6-Chloropurine Riboside , Arch Biochem Biophys 246 , 681 , 1986

Alonso, J. , Paolillo, L. , D'Auria, G. , Nogues, M. and Cuchillo, C.

1H-n.m.r. Studies on the Existence of Substrate Binding Sites in Bovine Pancreatic Ribonuclease A , Int J Pept Protein Res 34 , 66 , 1989

Alonso, J. , Paolillo, L. , D'Auria, G. , Nogues, M. and Cuchillo, C.

1-H-n.m.r. Studies on the Specificity of the Interaction Between Bovine Pancreatic Ribonuclease A and Dideoxynucleoside Monophosphates , Int J Pept Protein Res 31 , 537 , 1988返回搜狐，查看更多

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