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如图这种情况是什么原因呢，退火温度55℃，是以前的引物一直用的温度

dxy_xrns0gie 发表于 document.createTime- [内分泌]

请教： 我用的是sybr green荧光定量法，去年做的溶解曲线一直很好，只是低拷贝数10*3的模板没有CT值，今年开学来了出现双峰，而且FLO history达到扩增平台期时的值也很低，是不是

刘瑞 发表于 document.createTime- [基础科研-核酸基因技术]

qpcr溶解曲线双峰咋回事啊，同一个基因有的样本双峰有的样本单峰，是提的rna的问题吗？？

dxy_efv2ji09 发表于 document.createTime- [基础科研-核酸基因技术]

我做的引物是IL-17，首先试跑了个梯度，在58.8度的时候溶解曲线比较好，峰髙尖。但是在我跑标本的时候溶解曲线出现双峰，而且峰值相差不大，包括我的水对照，又经几次重复，依然是这种情况。觉得好像

wangxiaoli40 发表于 document.createTime- [基础科研-核酸基因技术]

qpcr溶解曲线双峰咋回事啊，同一个基因有的样本双峰有的样本单峰，是提的rna的问题吗？？

dxy_efv2ji09 发表于 document.createTime- [医药研发与应用-药理及临床试验]

各位大侠请帮忙看一下我用SYBR Green法做相对定量PCR检测三个目的基因得表达，但是用ABI7500三步法扩增得到的一个目的基因的溶解曲线有双峰，但CT值并不高于30，其他的目的基因倒挺好。问

zjlsunshine 发表于 document.createTime- [基础科研-核酸基因技术]

一直被qpcr结果困扰，引物换了三次🤣结果还是不尽人意。实验组的内参基因跑得出来，目的基因有双峰。对照组目的基因和内参基因都跑得出。排除过模板问题，组员拿我的模板跑都能跑出来，如果是引物问题

dxy_jkyrsrd3 发表于 document.createTime- [基础科研-核酸基因技术]

急急急！！！！！！！！各位大侠，请问溶解曲线出现双峰，第一个峰还在75℃左右，我考虑是二聚体，于是我增加模版量，减少引物量，提高退火温度后，那个峰不但没有降低反而增高了。是怎么回事？

冰竹happy 发表于 document.createTime- [学习交流互助专区]

同样的模板，内参的溶解曲线只有一个峰，但是目的基因的溶解曲线出现双峰，请问一下是引物二聚体吗？是不是只能更换引物？还是有其它解决方法呢？（引物序列是文献里面的）

dxy_6hd1tm65 发表于 document.createTime- [基础科研-核酸基因技术]

呀 为什么溶解曲线会双峰！！只有最后一个泳道的溶解曲线正常，难道是浓度的问题么，但是actin 的CT值都在 18差不多，浓度应该没问题呀，关键是由的样的溶解曲线正常，有的样的溶解曲线弄来弄去都是像上图的双峰

mitoooo 发表于 document.createTime- [基础科研-核酸基因技术]

目的基因IGF2BP1换了四对引物了，溶解曲线总是双峰，内参跑的就很好，也提高了退火温度，还是不行，不知道怎么优化了😭，难道要继续设计引物吗？这是pcr程序这是引物blast结果

dxy_a3969ae3 发表于 document.createTime- [基础科研-核酸基因技术]

如图，在主峰前面出现了小的次峰，大概73-75℃之间。是引物二聚体还是非特异性扩增呢？不知道这种情况应该如何解决？因为引物重新设计了两次了，如果通过改变其他条件能出现单峰的话，结果可信否？实验新手，还

proudme 发表于 document.createTime- [基础科研-核酸基因技术]

实验小白。失败很多次终于做出了曲线；但是分析数据发现我的目的基因（miRNa）溶解曲线双峰；我反思自己加样；是sybr、rox、taq酶加在一起；随后分装加入引物，最后加入cDNA与水混合物，至20

烟花月下 发表于 document.createTime- [基础科研-核酸基因技术]

跑了三次，溶解曲线一直双峰，不知道是我加样的问题还是引物有问题还是有污染，头疼，求大神指导

能挤出水的医学生 发表于 document.createTime- [基础科研-核酸基因技术]

本人实验小白一枚，最近在做RT-PCR，内参是单峰（图一），就是两个指标，一个是双峰（图二），一个是单峰不是同时出现，有时候还是双峰（图三），连续提了两批样，都是这样的结果，是什么原因呀？内参是单峰

dxy_9ieq7dy9 发表于 document.createTime- [基础科研-核酸基因技术]