淀粉酶活性测定实验标准报告

酶活力测定方法的研究 一研究背景及目的 酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白几乎所有的生化反应都离不开酶的催化所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色因此对酶的研究有着非常重要的意义。酶的活力是酶的重要参数反映的是酶的催化能力因此测定酶活力是研究酶的基础。酶活力由酶活力单位表征通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到。本实验选取萌发的禾谷类种子为材料通过对其所含两种淀粉酶活力的测定来研究酶活力测定的方法。 二 实验原理 萌发的种子中存在两种淀粉酶分别是α淀粉酶和β淀粉酶β淀粉酶不耐热在高温下易钝化而α淀粉酶不耐酸在pH3.6下则发生钝化1。本实验的设计利用β淀粉酶不耐热的特性在高温下70℃下处理使得β淀粉酶钝化而测定α淀粉酶的酶活性1。酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的麦芽糖的浓度利用比色法可以很容易测得。然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性拟将总活性与α淀粉酶的活性的差值看作β淀粉酶的活性再做进一步分析。实验中为了消除非酶促反应引起的麦芽糖的生成带来的误差每组实验都做了相应的对照实验在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。 三 材料、试剂与仪器 材料 萌发的小麦种子 试剂 ① 1淀粉溶液称取1克可溶性淀粉加入80ml蒸馏水加热熔解冷却后定容至100ml ②

pH5.6的柠檬缓冲液A液称取柠檬酸20.01克溶解后定容至1L B液称取柠檬酸钠29.41克溶解后定容至1L取A液5.5ml、B液14.5ml混匀即可 ③ 35-二硝基水杨酸溶液称取35-二硝基水杨酸1.00克溶于20ml 1M氢氧化钠中加入50ml蒸馏水再加入30克酒石酸钠待溶解后用蒸馏水稀释至100ml盖紧瓶盖保存 ④ 麦芽糖标准液称取0.100克麦芽糖溶于少量蒸馏水中小心移入100ml容量瓶中定容 ⑤ 0.4M NaOH 仪器 722光栅分光光度计编号990695 DK-S24型电热恒温水浴锅编号L-304056 离心机TDL-40B 配平天平 药物天平 电热锅 100ml容量瓶 50ml容量瓶 移液管 试管 研钵 烧杯 洗瓶 四 实验方法 本实验按照下列表格的中的操作步骤进行

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