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pET-N-His-TEV是一种用于表达N端含有His标签(His tag)的原核表达质粒。本质粒N端His标签后含有TEV酶切位点，可通过TEV Protease (P2307/P2308)切除N端的His标签。本质粒为卡那霉素抗性。 本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面，带有一个His标签的编码序列，含有6个组氨酸(6X His)。因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有His标签的目的蛋白。 本载体在N端His标签与多克隆位点之间含有TEV蛋白酶(TEV Protease)识别的七肽序列ENLYFQG，对应的核酸序列为GAGAACCTGTACTTCCAAGGG，因此可在目的蛋白纯化后用TEV蛋白酶切除N端His标签。TEV蛋白酶酶切发生在七肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除His标签的时候目的蛋白的N端会留下一个额外的氨基酸残基G。 通常可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。 pET-N-His-TEV质粒的主要信息如下： Feature Nucleotide Position f1 origin 12-467 Kanamycin resistance ORF 563-1645 PBR 322 origin 2084 LacI coding sequence 3518-4597 T7 promoter 4988-5004 His tag coding sequence 5079-5096 TEV Protease recogniton site sequence 5097-5117 Multiple cloning site(BamHI-XhoI) 5118-5165 T7 Terminator 5251-5297pET-N-His-TEV质粒(5304bp)的图谱如下：
pET-N-His-TEV质粒的详细图谱见说明书：https://www.beyotime.com/Manual/D2905 pET-N-His-TEV.pdf。 pET-N-His-TEV中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-TEV)包括： AatII Acc65I AflII AgeI AhdI AleI AscI AvrII BaeI BbvCI BfuAI BmgBI BmtI BsaI BseRI BsiWI BspMI BsrGI BstBI Bsu36I CspCI DraI EagI Eco53kI FseI KpnI MfeI MscI NcoI NheI NotI PacI PmeI PmlI PspXI RsrII SacI SacII SbfI ScaI SexAI SfiI SnaBI SpeI SrfI StuI SwaI ZraIpET-N-His-TEV中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-His-TEV once)包括： DraIII CAC,NNN`GTG 242 BssHII G`CGCG,C 3831 PsiI TTA|TAA 370 ApaI G,GGCC`C 4035 PvuI CG,AT`CG 943 PspOMI G`GGCC,C 4035 AsiSI GCG,AT`CGC 943 NmeAIII GCCGAG(N)19,NN` 4041 TspMI C`CCGG,G 1067 BstEII G`GTNAC,C 4060 XmaI C`CCGG,G 1067 MluI A`CGCG,T 4242 SmaI CCC|GGG 1069 BstAPI GCAN,NNN`NTGC 4563 NruI TCG|CGA 1286 SphI G,CATG`C 4771 AcuI CTGAAG(N)14,NN` 1597 SgrAI CR`CCGG,YG 4923 AlwNI CAG,NNN`CTG 1729 SgrAI CR`CCGG,YG 4923 BssSI C`ACGA,G 1968 XbaI T`CTAG,A 5034 PciI A`CATG,T 2141 NdeI CA`TA,TG 5074 SapI GCTCTTCN`NNN, 2258 BamHI G`GATC,C 5118 BspQI GCTCTTCN`NNN, 2258 HindIII A`AGCT,T 5124 BstZ17I GTA|TAC 2374 PstI C,TGCA`G 5130 Tth111I GACN`N,NGTC 2399 EcoRI G`AATT,C 5136 PflFI GACN`N,NGTC 2399 EcoRV GAT|ATC 5144 PpuMI RG`GWC,CY 3136 SalI G`TCGA,C 5148 FspI TGC|GCA 3164 BglII A`GATC,T 5154 BglI GCCN,NNN`NGGC 3182 XhoI C`TCGA,G 5160 PshAI GACNN|NNGTC 3401 PaeR7I C`TCGA,G 5160 HpaI GTT|AAC 3740 BlpI GC`TNA,GC 5221pET-N-His-TEV质粒中推荐使用的测序引物序列如下： T7 primer (4988-5004): 5′-TAATACGACTCACTATA-3′ pET-R primer (5218-5237): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′ pET-N-His-TEV的全序列信息：D2905 pET-N-His-TEV.docx。 不同原核表达质粒的比较和选择，以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页： http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 D2905-1μg pET-N-His-TEV 1μg D2905-100μg pET-N-His-TEV 100μg — 说明书 1份保存条件： -20℃保存。 注意事项： 本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
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