PCR注意事项

您所在的位置:网站首页 pcr扩增的四个阶段 PCR注意事项

PCR注意事项

2024-01-31 18:30| 来源: 网络整理| 查看: 265

对于 PCR 实验,污染主要是指含有 DNA 的微小液体颗粒的气溶胶污染,这些污染是从何而来呢?排除人为因素(错误操作等)和操作人员本身(头发、皮屑等)因素,在样品制备、 PCR 扩增和 PCR 前 / 后的实验操作中,都可能会引起气溶胶污染。按照产生方式,可分为 移液器引起的污染、PCR 仪引起的污染和 PCR 产物分析引起的污染(如图所示)

医疗机构临床基因扩增检测实验室 根据卫生部 2010 年颁布的《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》,临床基因 扩增检验实验室需要设置四个隔开的工作区域中,即试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区和扩增产物分析区(全自动核酸扩增 仪,如定量 PCR 仪时,产物分析区可以和扩增区合并),各个区域的功能如下:试剂储存和准备区:贮存试剂的制备、分装和扩增反应混合液的配制(最好在超净工作台中 进行);标本制备区:核酸(RNA、DNA)提取(视样品情况可在生物安全柜中操作)、 贮存及其加入至扩增反应管;扩增区:DNA 和 cDNA 的扩增及检测(定量 PCR 分析), 巢式 PCR 测定的第二次加样必须在扩增区进行;扩增产物分析区:扩增片段的进一步分析测定。

进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序,通过传递窗传递样品,气流方向也要按照单一流向,要从洁净区到污染区,可按照上述隔间顺序空气压力递减的方式进行,防止扩增产物随气流进入上游区域。其中标本制备区可设立正压条件,避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。扩增区和扩增产物分析 区是产生 PCR 产物气溶胶的主要区域,所以可设立负压条件,避免气溶胶外泄。基因扩增实验室控制气流的方式通常是通过实验室的相对正压或负压来达到目的,如安装排风扇、负压排风装置、空调通风系统等,最好采用全送全排方式,条件和空间允许的话,每个区域可设定缓冲区。



【本文地址】


今日新闻


推荐新闻


CopyRight 2018-2019 办公设备维修网 版权所有 豫ICP备15022753号-3