最实用的NCBI和PrimerBank在线引物设计窍门! – 王进的个人网站 |
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NCBI在线引物设计 1、寻找基因序列 PubMed: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed 以human p53为例进行引物设计。 ①选择核苷酸 ②输入基因+物种+mRNA ③搜索 ④单击选择 mRNA。 ⑤单击进入,此条目为我们所寻找的p53 human mRNA。 ⑥单击选择FASTA序列格式。
⑦单击选择“pick primers”即可跳转到Primer-BLAST页面。 2、参数设置 ①选择PCR模板区。 ②输入FASTA格式的序列或Accession Number,或者点击“选择文件”载入。 ③可设置正向引物和反向引物的起始和终止位置。 ④选择引物参数区。 ⑤若你自己设计好了引物,可在此输入引物验证引物好坏。 ⑥可输入PCR产物的大小和Tm值参数。⑦内含子/外显子选择区 框内可选择引物设计是否跨越内含子。
⑧引物特异性验证区 六种数据库可供选择,推荐使用“Refseq representative genomes”数据库,用户也可使用自己的序列作为搜索数据库。 3、引物序列输出
引物的可视化结果,可以显示所有引物的起始和终止位置,基因的CDS区,外显子的位置等。 Self complementarity值越小越好。
根据引物设计原则选择最佳引物序列,示例中的最佳引物序列为Primer pair 3,把引物复制下来发给引物合成公司合成即可。
Primer Bank 1、ID查询 以human p53为例进行引物设计,p53在human中的基因名为TP53,进入网站后,点击选择基因,输入基因+物种,最后点击搜索 PubMed:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed 如何寻找的TP53基因,以下图为例: 用PrimerBank设计引物不仅可以用基因信息搜索,同样可以通过mRNA和蛋白搜索,只需利用NCBI找到对应的ID输入即可。 2、基因信息输入进入PrimerBank网站后,选择数据库类型、物种,输入Gene ID,最后点击提交。 PrimerBank:https://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/ 3、引物序列输出最后输出确认基因信息,然后选择多对引物供。 |
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