质粒转染试剂使用说明书 |
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一、性能参数
产品名称:Transfection Reagent 简称“TR” 产品货号: FH880806 浓度:1μg/μl 推荐使用浓度:1μg-10μg/ml 规格:50μl (赠送) 保存条件:2-8℃ ,切勿放-20℃ 有效期至: 18个月 运输条件:常温运输 使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床。
二、产品详细描述 1、产品说明 TR(质粒转染试剂)是一种多聚阳离子聚合物,具有较高的阳离子电荷密度使得聚合物网络在任何 pH 下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞,其效果好于脂质聚酰胺,经进一步的改性后,其转染性能好于树枝状聚合物,而且它的细胞毒性低。
2、主要特点 · 高效转染各种贴壁细胞。 · 对悬浮细胞有很高的转染效率。 · 在同类产品中具有较高的转染效率和较低的毒性。 · 有无血清存在(0-20%)对转染试剂的效果无影响。 · 可用于单个质粒或多个质粒共转。 · 转染24-72小时后,有高的蛋白表达量。
3、注意事项 推荐在混合前使用Opti-MEM (Cat. No. 267485)或DMEM细胞培养基(Cat. No. SH30022.01B)稀释TR和核酸。 · 转染过程中勿向培养基中添加抗生素,以免造成细胞死亡。 · 不同批次实验请保持细胞接种条件相同。 · 转染前细胞的状态好坏对最终的转染效果高低影响很大,请务必保证转染前,细胞处于良好的生长状态。
三、质粒转染步骤 所列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞,其他培养材料,请参考表1按照转染规模调整,所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的DNA(μg)与TR(μg)的比值为1:3或1:4,转染状态良好的细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性。 1、贴壁细胞:转染前一天每孔0.5-2×105个细胞接种于500μl培养基中,在转染时细胞可长至90-95%融合。 悬浮细胞:在配制转染液前每孔4-8×105个细胞接种于500μl培养基中。 2、转染液制备,每孔细胞用量如下: A. 用50μlDMEM培养基(或者其他无血清培养基)稀释质粒DNA,轻轻混匀。 B. 取适量TR在50μl DMEM培养基中稀释,室温孵育5min。 C. 将前两步所稀释的DNA和TR 混合,轻轻混匀,室温放置30min。 3、在每孔细胞中加入混合后的转染液,轻轻摇匀。 4、贴壁细胞可在转染4-6h后可更换培养基,悬浮细胞可在转染后的18-48h之间,对细胞进行换液。转染18-48h之后可检测基因表达。如果检测到蛋白表达,请在转染后24-72h收集培养液。 5、对于稳定转染,在转染24h后以1:10传代培养,第二天可加入选择培养基。
表1 各种细胞培养板转染推荐用量 培养皿/板 表面积(cm2) 种板密度 培养液 混合液 质粒 TR 10cm 60 2-3×106cell/dish 10 ml 2×500μl 10μg 30-40 μl 60mm 20 8-10×105cell/dish 3 ml 2×150μl 3μg 9-12 μl 6孔 10 2-3×105cell/well 2 ml 2×100μl 2.5μg 7.5-10 μl 12孔 4 1-3×105cell/well 1 ml 2×50μl 1μg 3-4 μl 24孔 2 0.5-2×105cell/well 0.5 ml 2×25μl 0.5μg 1.5-2 μl 96孔 0.3 1000-100000cell/well 0.1 ml 2×5μl 0.1μg 0.3-0.4 μl 下图为我司TR试剂与其他转染试剂在不同细胞中的对比图
左图为我司TR转染试剂与市面常用的知名品牌转染试剂在转染HEK293细胞时的对比实验,实验结果表明,我司TR的转染效率要明显超过品牌试剂转染效率; 右图为我司TR转染试剂与市面常用的知名品牌转染试剂在转染HepG2细胞时的对比实验,实验结果表明,我司TR的转染效率要明显超过品牌试剂的转染效率。
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