PBS缓冲液怎么配制 |
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原标题:PBS缓冲液怎么配制 在实验中,经常会用到PB缓冲液和PBS缓冲液,那什么是PB和PBS? PB 是phosphate buffer的缩写,一般称为“磷酸盐缓冲溶液”,依靠磷酸缓冲对(H2PO4-和HPO42-)起到维持溶液pH值的作用,阳离子则一般是Na+或K+。 PBS 是phosphate buffer saline的缩写,中文通常称为“磷酸盐缓冲盐溶液”,更准确地译名应该是“磷酸盐缓冲生理盐水”,是生化实验广泛使用的一种缓冲溶液。通常是在PB的基础上加入0.9% NaCl,拥有和人体体液类似的渗透压和pH值。有时为了满足其它需求,需加入K+、Ca2+或Mg2+。这个时候就需要用到D-PBS(Dulbecco′s Phosphate Buffered Saline,杜氏磷酸盐缓冲盐水),相对于PBS,其中磷酸二氢钾浓度降低,避免与常见的钙离子Ca2+、Mg2+及一些重金属离子生成沉淀。 缓冲pH范围: 磷酸缓冲液的缓冲pH值范围非常广泛,可配置各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液。 酸性缓冲液:可直接用NaH2PO4或KH2PO4,pH范围在1-5; 碱性缓冲液:可直接用Na2HPO4或K2HPO4,pH范围在9-12; 中性缓冲液:用等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液按照不同比例进行混合,pH在5.5-8.5。 浓度计算: 通常所说的磷酸缓冲液的浓度,比如0.1M、0.01M,指的是溶液中含有的所有磷酸根离子的浓度,包括解离的和未解离的,而不是Na+或者K+的浓度。正是因为如此,在配制中性缓冲液时,用等浓度的H2PO4-和HPO42-溶液混合,并不影响磷酸根离子的浓度。 配置方法: PBS的配置方案有很多,Cold Spring Harbor Protocols Recipe如下所示:理论上需要调pH值,但在实际操作中,用超纯水配置后,pH就在7.2-7.24之间,通常不用调pH。 展开全文1×PBS配置方法(1L):按上表称取物质,溶于800ml水中,然后定容至1L。 由于使用量比较大,频率比较高,所以我们一般都会配置10×或者20×的母液,使用的时候直接稀释,这样比较方便。 10×PBS配置方法(1L):按上表称取物质,溶于800ml水中,然后定容至1L。使用的时候稀释10倍即可。 各种pH值的 0.2M PB(100ml)配方 : Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05,0.2 mol/L溶液为85.61克/升。 Na2HPO4·12H2O分子量 = 358.22,0.2 mol/L溶液为71.64克/升。 Na2HPO4·2H2O分子量 = 156.03,0.2 mol/L溶液为31.21克/升。 磷酸缓冲液优缺点: 优点:易配制各种浓度的缓冲液;适用的pH值范围宽,可配置各种pH值的缓冲液;pH受温度影响较小;缓冲能力强,缓冲液被稀释后pH变化小,如稀释十倍后pH的变化小于0.1。 缺点:浓度偏高时易与常见的钙离子Ca2+、Mg2+及一些重金属离子缔合形成沉淀;会抑制某些生化反应过程,如抑制某些酶(磷酸酯酶等)的催化过程。 题外: PBS的配置方案有很多,大同小异,主要原理是提供等渗透压和维持pH 7.2--7.4。 返回搜狐,查看更多 责任编辑: |
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